[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合重组疫苗株及其应用

说明书

本发明涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合重组疫苗株及其应用。所述猪繁殖与呼吸综合征嵌合重组疫苗株为通过将猪繁殖与呼吸综合征WH株GP5基因、M蛋白基因、N蛋白基因替换为NADC30‑like毒株对应的基因得到。本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征嵌合重组疫苗株的致病力低，性状稳定，经过40次传代仍然不会引起仔猪发病，安全性较高；并且免疫保护效果较好，可以同时免疫猪繁殖与呼吸综合征以及NADC30‑like感染，在新型二价疫苗的研制领域有重要价值。

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合重组疫苗株及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重影响生猪产业的重要病毒性疫病。该病影响广泛，对全世界养猪业造成了巨大经济损失。例如之前暴发的高致病性PRRS(HP-PRRS)，其临床发病率与死亡率高，给现有养猪业带来前所未有的经济损失，该病原与传统经典PRRSV相比，其特征为在Nsp2基因上存在30个不连续氨基酸缺失。之后又出现了PRRSV变异株，其病毒基因组特征为Nsp2存在131个不连续氨基酸缺失，缺失模式为“111+1+19”，并被命名为NADC30毒株。现有技术陆续分离到与NADC30基因同源性较高的毒株，统称为PRRSV类NADC30毒株(NADC30-like毒株)。NADC30-like毒株在发病猪场临床症状主要表现为：母猪流产等繁殖障碍，流产率高达30％-40％，保育及生长育肥猪严重的呼吸道症状，容易继发细菌性疾病，死淘率可达15％-20％，给现有生猪养殖带来了新的挑战。

目前，市场上的商品化PRRSV疫苗主要有两大类：灭活疫苗和弱毒疫苗。疫苗免疫是防控PRRSV感染的常用手段之一，但两类疫苗各存在优缺点。PRRSV灭活疫苗具有较高安全性，不存在散毒和毒力返强的风险，但免疫剂量大，副反应作用大，也不能有效激发机体的细胞免疫，从而难以有效控制PRRSV的发生及流行；弱毒疫苗在PRRSV防控中发挥重要作用，但是PRRSV弱毒苗对异源毒株提供的交叉保护效力有限，且存在毒力返强等风险。伴随着NADC30-like毒株持续遗传变异和毒株的多样性，加剧了疫苗预防与控制的难度。临床应用过程中发现，使用PRRSV弱毒活疫苗均不能有效抵抗NADC30-like毒株的感染，如免疫了VR2332毒株商品苗的猪场同样爆发了HENAN-XINX毒株、HENAN-HEB毒株、JL580毒株感染。

发明内容

本发明提供一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合重组疫苗株，通过将猪繁殖与呼吸综合征病毒株的GP5基因、M蛋白基因、N蛋白基因替换为NADC30-like毒株对应的基因得到了一种可以同时预防猪繁殖与呼吸综合征和NADC30-like的感染的毒株。

本发明提供一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合重组疫苗株，所述嵌合重组疫苗株为通过将猪繁殖与呼吸综合征病毒株的GP5基因、M蛋白基因、N蛋白基因替换为NADC30-like毒株对应的基因得到。

进一步地，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒株为猪繁殖与呼吸综合征WH株，所述NADC30-like毒株为SD1602株(GenBank No.MH651743)，该毒株为中国近年来的PRRS V流行毒株。

进一步地，所述嵌合重组疫苗株为通过将猪繁殖与呼吸综合征WH株基因序列中如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列替换为如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列得到。

本发明将弱毒株PRRSV经典毒株WH株的部分结构蛋白GP5、M、N替换为国内主要流行毒株NADC30-like毒株SD1602株的相应蛋白，相较于现有技术保留了更多毒株的结构蛋白，使得嵌合疫苗株对于PRRS而言具备更好的免疫原性。同时，NADC30-like毒株SD1602株本身具有较强的致病性，不适合直接作为活疫苗毒株，但是在灭活后，其免疫原性大幅度下降，难以提供足够的保护效果，而本发明构建的嵌合疫苗株相较于SD1602的灭活疫苗而言免疫效果更好，相较于SD1602的活疫苗而言安全性更好，同时达到活疫苗对于免疫原性和安全性的要求。