[发明专利]化合物、其制备方法与用途

说明书

本发明提出了化合物、其制备方法与用途。所述化合物具有式(Ⅰ)所示结构，该化合物作为Linker，通过两步反应即可完成拼接，所得拼接化合物具有很好的化学稳定性和光学性质，用于基因测序，该合成路线快速、直接、高效，且原子经济性高、操作简便、低成本，易于大规模生产，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及化合物、其制备方法及用途。

背景技术

第一代基因测序法即Sanger法，采用的是直接测序法，其基本原理即双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)缺乏PCR延伸所需的3'-OH，因此每当DNA链加入分子ddNTP，延伸便终止。每一次DNA测序是由4个独立的反应组成，将模板、引物和4种含有不同的放射性同位素标记的核苷酸的ddNTP分别与DNA聚合酶混合形成长短不一的片段，大量起始点相同、终止点不同的DNA片段存在于反应体系中，具有单个碱基差别的DNA序列可以被聚丙烯酰胺变性凝胶电泳分离出来，得到放射性同位素自显影条带，依据电泳条带读取DNA双链的碱基序列。

ABI公司在Sanger法测序的基础上进一步开发出荧光标记的双脱氧法测序试剂盒，即BigDye^TM试剂，接着再结合毛细管电泳，产生了ABI3730和ABI3500等非常成功的测试仪器，主要特点是测序读长可达1000bp，准确性高达99.999％。基于Sanger原理的毛细管电泳法的ABI3730，ABI3500以及其必须的BigDye测序试剂，仍是业内公认的超高精度测序的黄金标准。

BigDye^TM试剂包括Acceptor Dye、Linker、ddNTP三部分组成，以ddTTP-Linker-dTMRA为例，其目前的合成路线如下：

合成步骤：首先合成ddTTP，然后经过酰胺化、水解、酰胺化、水解四步反应得到ddTTP-Linker，之后再与dTMRA反应，完成最后的拼接，得到BigDye^TM试剂。

BigDye^TM试剂目前的合成方法中，以ddNTP为起始原料，经过五步反应才可完成与Dye的最终拼接，考虑到ddNTP的不稳定性，反应过程较复杂、产率极低、分离纯化难度较大，不能够用于大量的合成，故该方法具有较大的改善空间。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了化合物、其制备方法与用途，该化合物作为Linker，通过两步反应即可完成拼接，所得拼接化合物具有很好的化学稳定性和光学性质，用于基因测序，该合成路线快速、直接、高效，且原子经济性高、操作简便、低成本，易于大规模生产，具有广泛的应用前景。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种化合物。根据本发明的实施例，所述化合物为式(Ⅰ)所示结构，

其中，各R₁～R₁₀分别独立地为H、卤素、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氨基、C_1-6环烷基、3-8个原子组成的杂环基或者R₁～R₁₀连接形成5-8个环原子形成的杂环基，其中，所述5-8个环原子形成的杂环基未被取代或被选自下列的至少一个基团取代：1至4个卤素原子、氨基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氨基取代；X为H、卤素或氨基。

根据本发明实施例的化合物可以作为中间体，制备得到荧光标记的核苷酸，用于基因测序，使得合成路线快速、直接、高效，且原子经济性高、操作简便、低成本，易于大规模生产，具有广泛的应用前景。

根据本发明的实施例，所述组合物还可以具有下列附加技术特征：