[发明专利]一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法

说明书

本发明提供了一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，包括：A)将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品；B)采用高效液相色谱对曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品进行检测；色谱参数为：色谱柱为C18柱；柱温为35℃～45℃；检测波长为238nm～242nm，流动相流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述流动相为梯度洗脱；流动相A为7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈。本发明通过对曲氟尿苷及其异构体进行类苯酰基衍生化，采用反相色谱柱，实现了曲氟尿苷及其异构体的分离。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法。

背景技术

三氟胸苷作为一种癌症治疗药物，目前主要用于结直肠癌的治疗。经对其结构进行逆合成分析，该化合物为由2-脱氧-D-核糖、尿嘧啶、三氟甲基三个重要结构单元组成。因此，2-脱氧-D-核糖与尿嘧啶的缩合是制备曲氟尿苷的主要策略。曲氟尿苷是含有3个手性中心的多手性化合物，具体如式(I)结构。因此，在原料药质量控制中，立体异构体的控制就尤其关键。

详细的文献调研，确认了上述分析。目前报道的曲氟尿苷的合成路线主要是该路线以5-三氟甲基尿嘧啶和2-脱氧-D-核糖为起始原料，分别经硅基化保护和甲基化、对氯苯甲酰基化、氯代后经缩合、脱保护共经历六步反应制得曲氟尿苷，具体如式(II)所示。

结合曲氟尿苷结构和其主要的合成路线进行综合分析可知，其3,4位的手性结构可能来自呋喃糖结构，其杂质产生的概率较小。其主要的异构体杂质应为在合成工艺中形成的曲氟尿苷呋喃糖环1位的手性异构体。

因此，曲氟尿苷原料药质量控制应着重关注该异构体的含量。因此，开发一种检测该异构体的方法是非常必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，本发明方法分离度高，检测结果准确。

本发明提供了一种曲氟尿苷与其异构体的HPLC分离方法，包括：

A)将曲氟尿苷及其异构体在衍生化试剂、溶剂和缚酸剂的存在下分别进行衍生化，得到曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品；

B)采用高效液相色谱对曲氟尿苷衍生化样品和曲氟尿苷异构体样品进行检测；

色谱参数为：

色谱柱为C18柱；柱温为35℃～45℃；检测波长为238nm～242nm，流动相流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述流动相为梯度洗脱；

流动相A为7.2g/L～8.4g/L的磷酸二氢钠溶液；流动相B为乙腈。

优选的，所述曲氟尿苷异构体是指曲氟尿苷呋喃糖环1位的手性异构体。

优选的，所述衍生化试剂为苯甲酰氯、苯甲酸酐、对甲基苯甲酰氯、对甲基苯甲酸酐、对氯苯甲酰氯、对氯苯甲酸酐、对硝基苯甲酰氯或对硝基苯甲酸酐中的一种或几种。

优选的，所述溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或四氢呋喃中的一种或几种；所述缚酸剂为三乙胺或吡啶。

优选的，所述衍生化的温度为30℃～50℃，衍生化的时间为2～50min。

优选的，步骤A)所述衍生化后还包括加入1mol/L稀盐酸猝灭，经萃取后，浓缩，即得。

优选的，所述色谱柱为Waters Symmetry C18，5μm，4.6×150mm或Inertsil ODS-3，4.6×150mm 5μm；所述色谱柱温度为40℃；所述检测波长为240nm。