[发明专利]一种木霉属真菌tef1分子标记基因简并引物组及其应用

权利要求书

1.一种木霉属真菌tef1分子标记基因保守区域，其特征在于，包括SEQ ID NO.1和SEQID NO.2，所述SEQ ID NO.1为第四外显子3’端，核苷酸序列为：5’-RYRACAGCCAYGTSGACTCCGGMAAGTCKACCACCGTRAGT-3’，所述SEQ ID NO.2为第六外显子5’端：5’-AGACGCYCCCGGYCACCGTGAYTTCATCAAGAACATGATCACTGGTAC-3’；其中R＝A/G，Y＝C/T，S＝C/G，M＝A/C，K＝G/T。

2.一种简并引物组，其特征在于，包括序列SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，所述SEQ IDNO.3为正向引物，核苷酸序列为：5’-RYRACAGCCAYGTSGACTC-3’；所述SEQ ID NO.4为反向引物，核苷酸序列为：5’-GARGTACCAGTGATCATGTTCTTG-3’；其中，R＝A/G，Y＝C/T，S＝C/G；优选的，用于扩增权利要求1所述的木霉属真菌tef1分子标记基因保守区域。

3.一种PCR反应体系，其特征在于，包括：模板DNA、DNA聚合酶、dNTPs、权利要求2所述的简并引物组和去离子水。

4.根据权利要求3所述的PCR反应体系，其特征在于，所述简并引物组引物终浓度为0.4μM。

5.根据权利要求3或4所述的PCR反应体系，其特征在于，所述模板DNA的终浓度为0.8-20ng/μl。

6.一种权利要求1所述的简并引物组或权利要求3-5任一项所述的PCR反应体系在木霉属真菌菌种鉴定领域的应用。

7.一种木霉属真菌菌种鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1使用如权利要求2所述的简并引物组为扩增引物或采用权利要求3-5任一项所述的PCR反应体系，对目标菌种的tef1分子标记基因有效片段进行PCR扩增；

S2将扩增产物进行凝胶电泳；

S3将经凝胶电泳确认后的产物测序，获得tef1分子标记基因有效片段的核苷酸序列，经过比对后确定目标菌种的种属。

8.根据权利要求7所述的木霉属真菌菌种鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增过程中预变性温度为94-95℃；退火温度为55-58℃，延伸温度为72℃。

9.一种木霉属真菌菌种鉴定试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的简并引物组或权利要求3-5任一项所述的PCR反应体系。

10.一种权利要9所述木霉属真菌菌种鉴定试剂盒的使用方法，其特征在于，包括权利要求7或8所述的木霉属真菌菌种的鉴定方法。