[发明专利]一种依色格南的制备方法

权利要求书

1.一种依色格南的制备方法，该方法包括如下步骤：

(1)以Fmoc-Linker-氨基树脂为起始原料，采用Fmoc/tBu固相合成方法，利用偶联剂按照依色格南的氨基酸序列依次将Fmoc-氨基酸连接至溶胀后的氨基树脂上，得到全保护十七肽的肽树脂；

所述的连接至溶胀后的氨基树脂上的Fmoc-氨基酸依次为：Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH和Fmoc-Arg(pbf)-OH；即得到的所述全保护十七肽树脂是H-Arg(pbf)-Gly-Gly-Leu-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Cys(Trt)-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Phe-Cys(Trt)-Val-Cys(Trt)-Val-Gly-Arg(pbf)-氨基树脂；

(2)将步骤(1)得到的肽树脂以裂解液切割，同时脱去所有侧链保护基，再以冰乙醚沉淀切割液而获得依色格南线性粗肽；

(3)将步骤(2)得到的线性粗肽依色格南溶于水中得到多肽溶液，控制所述的多肽溶液中线性粗肽依色格南的浓度在0.5～5g/L范围内，并调节所述多肽溶液的pH值至8-10；然后放置经自然空气氧化，使线性粗肽依色格南在第5位与第14位、第7位与第12位间分别形成分子内二硫键，获得依色格南粗品溶液；

(4)将步骤(3)得到的依色格南粗品溶液过滤、分离纯化、转盐和冷冻干燥，获得依色格南三氟醋酸盐或依色格南醋酸盐。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的氨基树脂选自以下几种中的任意一种：Rink Amide-AM树脂、Sieber Amide树脂、PAL Amide树脂、Knorr树脂、Knorr-2-Chlorotrityl树脂或Rink Amide-MBHA树脂；优选的方案中，树脂的取代值为0.1～1.5mmol/g，树脂的颗粒大小为100～400目。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的偶联剂选自含有HOBt或HOAt的多种复合偶联剂；优选的所述复偶联剂含有DIC。

4.权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的复合偶联剂选自以下八种混合物中的任意一种：

X试剂、HATU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、HBTU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、HCTU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂与Y试剂DIC按摩尔比为1:(1～5)混合；

X试剂与EDC·HCl按摩尔比为1:(1～5)混合；

X试剂、PyAOP与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、PyBOP与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、TBTU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

其中，所述的X试剂为HOBt或HOAt，Y试剂为DIC。