[发明专利]一种原核生物来源的Argonaute蛋白及其应用

权利要求书

1.一种原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，所述Argonaute蛋白来源于中温原核生物kurthiamassiliensis，所述Argonaute蛋白简称pAgo，所述Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述pAgo复合物的ssDNA向导的长度为9至50个核苷酸。

2.如权利要求1所述的原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，所述pAgo复合物的ssDNA向导的长度为12至30个核苷酸。

3.如权利要求1所述的原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，所述pAgo复合物的ssDNA向导的长度为15至20个核苷。

4.如权利要求3所述的原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，所述pAgo复合物的ssDNA向导的长度为16、18或20个核苷酸。

5.如权利要求1所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，pAgo在10至80℃具有核酸酶活性。

6.如权利要求5所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，pAgo在37℃下具有核酸酶活性。

7.如权利要求1-6任一项所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，pAgo以及pAgo复合物的靶RNA没有高级结构；或，有高级结构；或，为双链RNA；或，为体外转录的RNA；或，为病毒基因组RNA；或，为信使RNA；或，为细胞内的其他RNA。

8.如权利要求7所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，pAgo以及pAgo复合物的向导是5’末端磷酸化的ssDNA；或，5’末端羟基化的ssDNA；或，5’末端磷酸化的RNA。

9.如权利要求8所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，pAgo以及pAgo复合物的核酸酶活性需要存在至少一种阳离子选自Mn2+，Mg2+，Ca2+，Cu2+，Fe2+，Co2+，Zn2+和Ni2+组成的组。

10.如权利要求9所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，pAgo以及pAgo复合物的pAgo是提取的；或，是合成的。

11.如权利要求10所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物，其特征在于，pAgo靶DNA是ssDNA或双链DNA中的一种。

12.一种编码如权利要求11所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物的多核苷酸。

13.一种基于如权利要求4所述原核生物来源的Argonaute蛋白形成的pAgo复合物的体外切割RNA的方法，其特征在于，所述体外切割RNA的方法包括：

步骤一，基于pAgo和ssDNA向导形成pAgo-向导复合物；

步骤二，令所得的pAgo-向导复合物与靶RNA接触，所述靶RNA具有与所述向导序列大部分互补的核苷酸序列，所述pAgo-向导复合物在特定位点切割靶RNA。

14.一种包含如权利要求12所述多核苷酸的表达载体。

15.一种包含如权利要求14所述表达载体的病毒载体。

16.如权利要求14所述病毒载体，其特征在于，所述病毒载体是慢病毒载体或逆转录病毒载体。

17.一种包含如权利要求9所述pAgo复合物的试剂盒。