[发明专利]家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子及其应用

说明书

本发明属于家蚕转基因技术领域，具体涉及一种家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子及其应用，所述启动子的核苷酸基因如SEQ ID NO：6所示，该启动子可以驱动外源基因在家蚕中经家蚕微粒子虫诱导下表达，不但适用于基因功能分析等分子生物学理论研究，同时适用于利用基因工程进行家蚕品种改良，特别是家蚕抗微粒子病的品种培育，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于家蚕转基因技术领域，具体涉及一种家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子及其应用。

背景技术

微孢子虫病是由细胞内专性寄生的微孢子虫引起的，危害人类健康、经济动物产业发展及生态环境稳定。蚕丝业作为我国的传统优势产业，亦长期饱受微孢子虫病害的侵扰。当前，我国每年因微粒子病而带来的直接经济损失即达上亿元，全国主要蚕种场用于防控该病的花费占蚕种生成总支出的一半。然而，目前生产上尚未发现对该病有抗性的家蚕材料。

随着家蚕转基因技术的突破和完善，转基因技术已成为家蚕抗性材料选育的强有力工具。但是，目前通过转基因家蚕育种方面利用的还是组成型表达的启动子。利用组成型启动子一方面外源基因的表达效率会降低，另一方面会对家蚕本身带来负担。目前鲜有关于家蚕微粒子虫诱导型启动子的报道。因此，开发家蚕微粒子虫诱导型启动子对在构建家蚕微粒子虫抗性育种素材中减少外源基因组成型表达导致的生理负荷，提高转基因家蚕的抗性以及开发新的微粒子虫抗性系统具有重大意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子，目的之二在于提供一种重组载体，目的之三在于提供一种重组表达载体的构建方法，目的之四在于提供一种重组细胞，目的之五在于提供一种外源蛋白，目的之六在于提供一种家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子在培育抗微粒子虫家蚕中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

2、一种重组表达载体，所述重组表达载体包含所述家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子。

3、一种重组表达载体的构建方法，所述方法为，根据所述家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT2的启动子的核苷酸序列，设计含有表达载体酶切位点的上、下游引物，以家蚕基因组DNA为模板，进行PCR扩增，获得含所述启动子的目的片段，将所述目的片段连接在表达载体上，构建重组表达载体。

作为优选的技术方案之一，所述表达载体为pSLfa1180fa载体。

作为优选的技术方案之一，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。

4、一种重组细胞，所述重组细胞是由所述重组表达载体转化受体细胞而得。

5、一种外源蛋白，所述外源蛋白是由所述重组细胞所表达。

6、所述家蚕微粒子虫诱导表达基因BmPUGT3的启动子在培育抗微粒子虫家蚕中的应用。本发明的有益效果在于：

本发明所构建的BmPUGT2启动子可以驱动外源基因在家蚕中经家蚕微粒子虫诱导下表达，不但适用于基因功能分析等分子生物学理论研究，同时适用于利用基因工程进行家蚕品种改良，特别是用于家蚕抗微粒子病的品种培育，比如诱导表达内外源致死基因以及诱导型的基因编辑系统，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为BmPUGT2的基因序列图，斜体加粗的ATG表示翻译起始位点，TGA表示终止密码子，灰色框代表非翻译区；