[发明专利]一种微生物绝对定量方法及其应用

权利要求书

1.一种微生物定量方法，其特征在于，所述方法包括：待测样品中DNA发生解链；加入过量信号探针，与待测样本的目标核苷酸片段结合形成双链，使G四链体裸漏在序列之外；加入足量淬灭探针与未结合的信号探针形成双链，破坏G四链体结构；利用裸漏在外G四链体与血红素反应形成具有过氧化氢酶活性的G四链体/血红素模拟酶，结合过氧化氢酶的活性表征微生物的生物量；其中，所述方法中不需要使用仪器使待测样品中DNA发生扩增；

当定量细菌微生物时，信号探针序列为SEQ ID NO.1所示，对应的淬灭探针序列分别为SEQ ID NO.2所示；当定量芽孢杆菌属微生物时，信号探针序列为SEQ ID NO.5所示，对应的淬灭探针序列分别为SEQ ID NO.6所示；当定量乳杆菌属微生物时，信号探针序列为SEQ IDNO.9所示，对应的淬灭探针序列分别为SEQ ID NO.10所示；当定量酿酒酵母时，信号探针序列为SEQ ID NO.13所示，对应的淬灭探针序列分别为SEQ ID NO.14所示；当定量真菌微生物时，信号探针序列为SEQ ID NO.17所示，对应的淬灭探针序列分别为SEQ ID NO.18所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品为含有菌体、基因组或宏基因组的样品。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品是收集该样品中的菌体后不经基因组提取，直接进行DNA解链处理。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法为绝对定量方法，还包括：建立过氧化氢酶活性和微生物的生物量的标准曲线，或者与过氧化氢酶活性呈相关性的指标和微生物的生物量的标准曲线；检测待测样品时，将检测到的过氧化氢酶活性或者指标代入标准曲线，即获得待测样品中的微生物的生物量。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品为发酵食品或者取自发酵食品发酵过程中的样品，或者肠道、土壤、水体等环境样本。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵食品为以下任意一种以上：白酒、黄酒、酱油、啤酒、葡萄酒、食醋、发酵茶、传统发酵蔬菜、发酵饮料、酸奶、干酪、果醋、酒酿、豆豉、乳腐。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵食品为酒精饮品、发酵米面食品。

8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述微生物为以下任意一种或者多种类型：酿酒酵母、芽孢杆菌属、乳杆菌属。

9.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述微生物为以下任意一种或者多种类型：细菌、真菌。

10.一种用于多种微生物绝对定量的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒能够用于实现待测样本中如下至少两种类型的微生物的检测：所有的细菌微生物、所有的真菌、所有的酿酒酵母、所有的芽孢杆菌属、所有的乳杆菌属；所述检测试剂盒中，至少含有如下2套能检测不同种属的探针，每套探针中包括信号探针和淬灭探针；

（1）细菌探针：信号探针序列为SEQ ID NO.1，对应的淬灭探针序列为SEQ ID NO.2所示；

（2）芽孢杆菌探针：信号探针序列为SEQ ID NO.5，对应的淬灭探针序列为SEQ ID NO.6所示；

（3）乳杆菌属探针：信号探针序列为SEQ ID NO.9，对应的淬灭探针序列为SEQ IDNO.10所示；

（4）酿酒酵母探针：信号探针序列为SEQ ID NO.13，对应的淬灭探针序列为SEQ IDNO.14；

（5）真菌探针：信号探针序列为SEQ ID NO.17，对应的淬灭探针序列为SEQ ID NO.18。