[发明专利]基于多肽-金团簇原位定量细胞膜蛋白表达量的电化学传感器有效
申请号: | 202011461773.1 | 申请日: | 2020-12-08 |
公开(公告)号: | CN112415071B | 公开(公告)日: | 2022-05-24 |
发明(设计)人: | 高靓;韩莹;高学云 | 申请(专利权)人: | 北京工业大学 |
主分类号: | G01N27/327 | 分类号: | G01N27/327;G01N33/543 |
代理公司: | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人: | 张立改 |
地址: | 100124 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 基于 多肽 金团簇 原位 定量 细胞 膜蛋白 表达 电化学传感器 | ||
基于多肽‑金团簇原位定量细胞膜蛋白表达量的电化学传感器,涉及电化学传感领域。所述电化学传感器以玻碳电极为基底,在其表面修饰有多功能的多肽‑金团簇。所述金团簇含有与所述细胞膜蛋白特异性结合的靶向肽。所述金团簇具有电催化作用,能够有效加速电极表面的电子传递速率。制备的电化学传感器,可用于原位定量检测细胞膜蛋白表达量,具有特异性强、灵敏度高、操作简便和成本低的特点。
技术领域
本发明涉及电化学传感领域,具体涉及一种基于多肽-金团簇原位定量细胞膜蛋白表达量的电化学传感器及其制备方法和应用。
背景技术
金团簇是指由几个到几百个金原子组成的原子聚集体。由于连续的电子能级状态变为离散的能级,并且大小与费米电子波长相当,金团簇表现出优异的光电化学性质以及良好的生物相容性。并且因其具有较高的表面体积比,提供了大量的结合位点用于催化或化学传感。近年来,金团簇以其独特的电化学和电催化性质已经应用到电分析化学的各个领域中。
目前,已有多种分析方法可以检测细胞膜蛋白表达。例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质免疫印迹法(Western Blot)、串联质谱法等。尽管这些分析方法发展较为成熟且具有较高的分析灵敏度,但以上分析方法都需要裂解细胞获得蛋白裂解液进行分析。蛋白裂解往往导致待分析物的损失,在同一裂解液中分析多种蛋白成分也有互相干扰的情况,同时细胞裂解中所使用的表面活性剂往往干扰质谱定量分析的准确性。另外,常规分析方法需要昂贵的仪器和专业的操作人员,操作程序复杂,耗时长,不方便广泛应用于常规诊断。
因此,目前迫切需要建立一种精准、快速、灵敏、简便、成本低廉的方法用于定量分析细胞膜蛋白表达量。
发明内容
本申请提供了一种基于多肽-金团簇原位定量细胞膜蛋白表达量的电化学传感器及其制备方法和应用,能够对细胞膜蛋白进行快速灵敏检测,且成本低廉、操作简便。
本发明所采用的技术方案如下:
一种基于多肽-金团簇用于原位定量检测细胞膜蛋白的电化学传感器的制备方法和应用,包括如下步骤:
(1)制备特异性识别细胞膜蛋白的多肽-金团簇;
(2)电化学传感器的组装;
(3)电化学原位定量分析目标细胞膜蛋白表达量。
其中,所述多肽-金团簇含有与所述细胞膜蛋白结合的靶向肽。
在一些实施方案中,所述多肽-金团簇的制备步骤如下:
(a)将靶向性多肽溶于超纯水中配制成1mM~2mM多肽溶液并置于干净干燥的材料反应瓶中,加入磁子,放在37℃水浴锅中搅拌均匀,如以600rpm/min搅拌3min;
(b)取HAuCl4标准品配制成25mM HAuCl4溶液,滴入(a)所述多肽溶液中,在37℃水浴锅中搅拌均匀如以600rpm/min继续搅拌3min,得到多肽-HAuCl4混合液;
其中,多肽与HAuCl4的物质的量之比为1:1~1:1.5;
(c)将NaOH溶液滴入步骤(b)所述混合液中,调节pH值到12,所形成的溶液继续在37℃下搅拌如以600rpm/min继续搅拌,超滤得到多肽-金团簇。
在一些实施方案中,所述电化学传感器的组装过程为:
(a)将直径为5mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨,仔细打磨至表面光亮,然后用无水乙醇和去离子水超声清洗,晾干待用;
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