[发明专利]一种预防黄颡鱼“裂头病”浸泡疫苗株的构建和应用

权利要求书

1.一株高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO：M2020561。

2.根据权利要求1所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌，其特征在于，所述高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌为双缺失突变株，所述双缺失突变株同时缺失鮰爱德华氏菌Ⅰ型菌毛fimA基因上游的负调控区和鮰爱德华氏菌毒力岛Ⅲ型分泌系统的编码基因。

3.根据权利要求2所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌，其特征在于，所述双缺失突变株的野生型菌株为鮰爱德华氏菌HSN-1。

4.根据权利要求2所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌，其特征在于，所述负调控区为鮰爱德华氏菌Ⅰ型菌毛操纵子中fimA基因上游区段。

5.根据权利要求4所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌，其特征在于，所述负调控区为鮰爱德华氏菌Ⅰ型菌毛操纵子的fimA基因的﹣245—﹣50 bp区域。

6.根据权利要求2所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌，其特征在于，所述鮰爱德华氏菌毒力岛Ⅲ型分泌系统的编码基因为毒力基因eseJ。

7.一种高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌疫苗，其特征在于，其含有权利要求1-6任一项所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌。

8.根据权利要求7所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌疫苗，其特征在于，所述高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌疫苗为经济鱼类疫苗；

所述经济鱼类为鲇形目鱼类。

9.根据权利要求8所述的高侵袭力弱毒力鮰爱德华氏菌疫苗，其特征在于，所述鲇形目鱼类为黄颡鱼、斑点叉尾鮰、南方大口鲶、革胡子鲶和长吻鮠中的至少一种。

10.一种高侵袭力弱毒力爱德华氏菌的构建方法，其特征在于，其包括如下步骤：

先敲除爱德华氏菌的毒力岛Ⅲ型分泌系统的编码基因获得弱毒力爱德华氏菌，再敲除弱毒力爱德华氏菌I型菌毛操纵子的负调控区获得高侵袭力弱毒力爱德华氏菌；

或者先敲除爱德华氏菌I型菌毛操纵子的负调控区，再敲除爱德华氏菌的毒力岛Ⅲ型分泌系统的编码基因获得高侵袭力弱毒力爱德华氏菌；

所述毒力岛Ⅲ型分泌系统的编码基因为毒力基因eseJ，所述I型菌毛操纵子的负调控区为fimA基因的﹣245—﹣50 bp区域；

所述爱德华氏菌为鮰爱德华氏菌。

11.根据权利要求10所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

以野生型爱德华氏菌的基因组为模板，分别扩增拟缺失的毒力基因eseJ的上游片段和下游片段，然后将上游片段和下游片段组合连接至自杀质粒中，转化大肠杆菌，获得阳性菌株1，将所述阳性菌株1与野生型爱德华氏菌共培养，经过两次同源重组，筛选获得爱德华氏菌eseJ缺失突变株；

以野生型爱德华氏菌的基因组为模板，扩增fimA上游负调控区的上游片段和下游片段，组合连接至自杀质粒中，转化至大肠杆菌，获得阳性菌株2，将筛选获得的大肠杆菌的阳性菌株2与所述爱德华氏菌eseJ缺失突变株共培养，经过两次同源重组，筛选得到双缺失突变株；

所述爱德华氏菌为鮰爱德华氏菌；fimA上游负调控区为fimA基因的﹣245—﹣50 bp区域。