[发明专利]一种利用经修饰化的离子液体萃取果蔬中劣变蛋白酶的方法

说明书

本发明涉及一种利用经修饰化的离子液体萃取果蔬中劣变蛋白酶的方法以及通过该方法获得的劣变蛋白酶。利用该方法萃取，萃取条件温和、萃取时间短且所得到的酶活性较高。

技术领域

本发明涉及一种利用经修饰化的离子液体萃取果蔬中劣变蛋白酶的方法、以及通过这种方法制备的劣变蛋白酶。

背景技术

我国是一个农业大国，每年的果蔬产量都远远超过其它国家，是我国大部分人民重要的经济来源，但与此同时高产量的背后也存在着高风险，果蔬的保存时间一般都比较短或者保存条件苛刻，很容易产生腐败变质。而果蔬的腐烂在很大程度上是酶促反应的结果，与酶活性变化密切相关。

目前，番茄等植物性农产品劣变蛋白酶的萃取多依赖于传统的缓冲溶液法，利用缓冲溶液法提取出来的酶活性一般较低，而且提取时间较长，一般需要40min，耗时较长。

因此，现有技术亟需一种萃取条件温和、萃取时间短且所得到的酶活性较高的劣变蛋白酶萃取方法。

发明内容

针对现有缓冲溶液萃取酶的方案以及现有的其它方案存在的萃取时间长、萃取所得酶活不高的问题，本发明人经过潜心研究发现，离子液体能萃取劣变蛋白酶，是由于离子液体具有较强的溶剂作用，且与蛋白质有多种分子作用力，尤其是氢键作用力、极性作用力和离子电荷作用力均会极大提高超氧化物歧化酶在离子液体水溶液中的溶解度；而修饰化的离子液体比普通离子液体更容易与劣变蛋白酶类形成氢键，而氢键作用力是离子液体与蛋白质的多种作用力之一。利用经修饰化的离子液体萃劣变蛋白酶的条件温和、萃取的酶活较高且时间更短。而利用经修饰化的离子液体对劣变蛋白酶进行萃取的研究几乎没有。

因此，本发明提供了一种利用经修饰化的离子液体萃取果蔬中劣变蛋白酶的方法。利用该方法萃取，萃取条件温和、萃取时间短且所得到的酶活性较高。

具体而言，第一方面，本发明提供了一种利用经修饰化的离子液体萃取果蔬中的劣变蛋白酶的方法，所述方法包括以下步骤：

a.原料预处理；

b.加入经修饰化的离子液体与任选的辅助剂以及水构造双相萃取体系的萃取剂进行萃取；

c.分离萃取液；以及

d.酶活检测比较。

第二方面，本发明提供了通过如上所述的方法制备的劣变蛋白酶。

有益效果

本发明提出了利用经修饰化的离子液体萃取果蔬中劣变蛋白酶的方法。离子液体能萃取劣变蛋白酶，是由于离子液体具有较强的溶剂作用，且与蛋白质有多种分子作用力，尤其是氢键作用力，极性作用力，离子电荷作用力，均会极大提高超氧化物歧化酶在离子液体水溶液中的溶解度。经修饰化的离子液体比普通离子液体更容易与劣变蛋白酶类形成氢键，而氢键作用力是离子液体与蛋白质的多种作用力之一。利用经修饰化的离子液体萃劣变蛋白酶的条件温和、萃取的酶活较高且时间更短。

酶活可以表征番茄的劣变情况，酶活性的高低与果蔬的货架期以及劣变程度有很大的关系，在生产运输加工过程中番茄会发生不同程度的劣变，采用本发明的方法可以起到快速检测番茄劣变程度的作用，以便其用于后期果蔬劣变的研究。

附图说明

图1是两种离子液体体系提取蛋白质过程及原理示意图，其中“IL”表示离子液体。

图2是使用[(H₂NC₂)Mim]Br进行萃取时，[(H₂NC₂)Mim]Br用量与K₂HPO₄加入量交互作用的响应图。