[发明专利]一种靶向CLL1和NKG2D配体的双靶点嵌合抗原受体及其应用

权利要求书

1.一种靶向CLL1和NKG2D配体的双靶点嵌合抗原受体，其特征在于，所述双靶点嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号传导结构域；

所述抗原结合结构域包括抗CLL1抗体和NKG2D；

所述NKG2D为NKG2D胞外段；

所述抗CLL1抗体包括如SEQ ID NO:1所示的轻链可变区和如SEQ ID NO:2所示的重链可变区；或者

所述抗CLL1抗体包括如SEQ ID NO:3所示的轻链可变区和如SEQ ID NO:4所示的重链可变区；或者

所述抗CLL1抗体包括如SEQ ID NO:5所示的轻链可变区和如SEQ ID NO:6所示的重链可变区；

所述NKG2D胞外段包括如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；

所述抗原结合结构域包括依次串联的抗CLL1抗体轻链可变区SEQ ID NO:1、抗CLL1抗体重链可变区SEQ ID NO:2和NKG2D胞外段SEQ ID NO:7；或者

所述抗原结合结构域包括依次串联的NKG2D胞外段SEQ ID NO:7、抗CLL1抗体轻链可变区SEQ ID NO:1和抗CLL1抗体重链可变区SEQ ID NO:2；或者

所述抗原结合结构域包括依次串联的抗CLL1抗体轻链可变区SEQ ID NO:3、抗CLL1抗体重链可变区SEQ ID NO:4和NKG2D胞外段SEQ ID NO:7；或者

所述抗原结合结构域包括依次串联的NKG2D胞外段SEQ ID NO:7、抗CLL1抗体轻链可变区SEQ ID NO:3和抗CLL1抗体重链可变区SEQ ID NO:4；或者

所述抗原结合结构域包括依次串联的抗CLL1抗体轻链可变区SEQ ID NO:5、抗CLL1抗体重链可变区SEQ ID NO:6和NKG2D胞外段SEQ ID NO:7；或者

所述抗原结合结构域包括依次串联的NKG2D胞外段SEQ ID NO:7、抗CLL1抗体轻链可变区SEQ ID NO:5和抗CLL1抗体重链可变区SEQ ID NO:6；

所述信号肽包括CD8α信号肽；

所述铰链区包括CD8α铰链区；

所述跨膜结构域包括CD8α跨膜区；

所述信号传导结构域包括CD3ζ；

所述信号传导结构域还包括4-1BB；

所述嵌合抗原受体包括如SEQ ID NO:8～13之一所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的双靶点嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗CLL1抗体轻链可变区、抗CLL1抗体重链可变区和NKG2D胞外段之间通过连接肽连接。

3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括权利要求1-2任一项所述的双靶点嵌合抗原受体的编码基因。

4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括如SEQ ID NO:14～15之一所示的核酸序列。

5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求3或4所述的核酸分子。

6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为含有权利要求3或4所述的核酸分子的病毒载体。

7.根据权利要求6所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为含有权利要求3或4所述的核酸分子的慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种。

8.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒由转染有权利要求5-7任一项所述的表达载体和辅助质粒的哺乳细胞制备得到。

9.一种CAR-T细胞，其特征在于，所述CAR-T细胞表达权利要求1-2任一项所述的双靶点嵌合抗原受体。

10.根据权利要求9所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述CAR-T细胞的基因组中整合有权利要求3或4所述的核酸分子。