[发明专利]用于防止正亮氨酸错误地掺入蛋白质中的方法和组合物

权利要求书

1.一种用于预防或减少正亮氨酸错误地掺入到蛋白质或多肽中的方法，所述方法包括在微生物中表达蛋白质或多肽，其中所述微生物是突变的微生物，其产生足以防止或减少正亮氨酸错误地掺入到蛋白质中或多肽中的程度或范围的甲硫氨酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中微生物是细菌。

3.根据权利要求1所述的方法，其中微生物是大肠杆菌。

4.根据权利要求1所述的方法，其中微生物是反馈抑制或反馈不敏感高丝氨酸琥珀酰转移酶微生物。

5.根据权利要求1所述的方法，其中微生物是解除甲硫氨酸生产抑制的微生物。

6.根据权利要求1所述的方法，其中微生物含有突变的metA等位基因、突变的metK等位基因、或突变的metA等位基因和突变的metK等位基因。

7.根据权利要求1所述的方法，其中在不存在向培养基外源添加甲硫氨酸或无甲硫氨酸进料下进行微生物中蛋白质或多肽的表达。

8.一种微生物，其含有突变的metA等位基因、突变的metK等位基因、或突变的metA等位基因和突变的metK等位基因。

9.根据权利要求8所述的微生物，其中所述微生物包含突变的metA等位基因，其中所述突变的metA等位基因包含编码MetA中氨基酸取代的核酸序列，所述MetA氨基酸取代选自在氨基酸位置27的精氨酸至半胱氨酸的取代、在氨基酸位置64的谷氨酰胺至谷氨酸的取代、在氨基酸位置294的酪氨酸至半胱氨酸的取代、在氨基酸位置296的异亮氨酸至丝氨酸的取代、在氨基酸位置298的脯氨酸至亮氨酸的取代、和在氨基酸位置296的异亮氨酸至丝氨酸的取代和在氨基酸位置298的脯氨酸至亮氨酸的取代。

10.根据权利要求9所述的微生物，其中所述微生物包含突变的metA等位基因，其中所述突变的metA等位基因包含选自SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25和SEQ IDNO:26的核酸序列。

11.根据权利要求8所述的微生物，其中所述突变的metK等位基因包含编码在氨基酸位置185上包含缬氨酸至谷氨酸取代的MetK中氨基酸取代的核酸序列，或在metK等位基因的核酸残基位置1132上包含胞嘧啶碱基缺失的核酸序列。

12.根据权利要求11所述的微生物，其中所述微生物包含突变的metK等位基因，其中所述突变的metK等位基因包含选自SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28的核酸序列。

13.根据权利要求8所述的微生物，其中所述微生物包含突变的metA等位基因，其中所述突变的metA等位基因包含编码MetA中氨基酸取代的核酸序列，所述MetA氨基酸取代选自在氨基酸位置27的精氨酸至半胱氨酸的取代、在氨基酸位置64的谷氨酰胺至谷氨酸的取代、在氨基酸位置294的酪氨酸至半胱氨酸的取代、在氨基酸位置296的异亮氨酸至丝氨酸的取代、在氨基酸位置298的脯氨酸至亮氨酸的取代、和在氨基酸位置296的异亮氨酸至丝氨酸的取代和在氨基酸位置298的脯氨酸至亮氨酸的取代，并且进一步地其中所述突变的metK等位基因包含编码在氨基酸位置185上包含缬氨酸至谷氨酸取代的MetK中氨基酸取代的核酸序列，或在metK等位基因的核酸残基位置1132上包含胞嘧啶碱基缺失的核酸序列。