[发明专利]一种胎牛血清去除内毒素的方法

权利要求书

1.一种胎牛血清去除内毒素的方法，其特征在于，通过以下方法实现：在磁性琼脂糖微球偶联与内毒素特异性结合的氨基酸片段，所述氨基酸片段与内毒素特异性结合后，通过磁力吸附所述磁性琼脂糖微球，达到去除胎牛血清去除内毒素的目的；

所述氨基酸序列为脂多糖结合蛋白的氨基酸序列或杀菌通透性增加蛋白的氨基酸序列；

所述脂多糖结合蛋白的氨基酸序列为其N端1-212个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示；

所述杀菌通透性增加蛋白的氨基酸序列为其N端1-199个氨基酸，其氨基酸序列如SEQID NO：2所示。

2.如权利要求1所述的胎牛血清去除内毒素的方法，其特征在于，所述磁性琼脂糖微球偶联与内毒素特异性结合的氨基酸片段，通过以下方法实现：

(1)通过PCR方式获取脂多糖结合蛋白或杀菌通透性增加蛋白基因的N端核苷酸序列；

(2)制备含有步骤(1)N端序列的重组质粒，将该质粒转化宿主菌；

(3)培养宿主菌至一定的菌体浓度后，裂解菌体离心收集上清液，获得含有N端序列的蛋白粗提液，将蛋白粗体液经Ni-NTA纯化柱进行纯化；

(4)在琼脂糖磁珠悬浮液中加入步骤(3)获得的纯化后的蛋白溶液，室温混合，加入Blocking Buffer室温反应，磁力架富集磁珠，弃上清液，再加入Storage Buffer，充分混合，用磁力架富集磁珠，弃上清液，最后加入4mL Storage Buffer，即可获得偶联了与内毒素特异性结合的氨基酸片段的磁性琼脂糖微球。

3.如权利要求2所述的胎牛血清去除内毒素的方法，其特征在于，所述脂多糖结合蛋白的N端核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.如权利要求2所述的胎牛血清去除内毒素的方法，其特征在于，所述杀菌通透性增加蛋白的N端核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

5.如权利要求3所述的胎牛血清去除内毒素的方法，其特征在于，PCR扩增如SEQ IDNO：3所示的核苷酸序列的引物为SEQ ID NO：5～6所示。

6.如权利要求4所述的胎牛血清去除内毒素的方法，其特征在于，PCR扩增如SEQ IDNO：4所示的核苷酸序列的引物为SEQ ID NO：7～8所示。

7.一种由权利要求2所述的胎牛血清去除内毒素的方法制备的磁性琼脂糖微球。