[发明专利]生物乙醇发酵中植物乳杆菌提高酿酒酵母乙醇耐受力的方法在审
| 申请号： | 202011469662.5 | 申请日： | 2020-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN112646736A | 公开（公告）日： | 2021-04-13 |
| 发明（设计）人： | 李灏;许亚丽;刘波;张晓茹;贺先琳 | 申请（专利权）人： | 北京化工大学 |
| 主分类号： | C12N1/16 | 分类号： | C12N1/16;C12N1/20;C12R1/25;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人： | 刘萍 |
| 地址： | 100029 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生物 乙醇 发酵 植物 杆菌 提高 酿酒 酵母 耐受 方法 | ||
1.生物乙醇发酵中植物乳杆菌提高酿酒酵母乙醇耐受力的方法，其特征在于：
所用的酿酒酵母S288c(ATCC 204508)和植物乳杆菌ATCC 8014，均购买自中国微生物菌种保藏中心；
针对植物乳杆菌的活化及发酵培养基均为MRS培养基，其配方为：5g酵母浸粉，10g蛋白胨，20g葡萄糖，10g牛肉粉，2g柠檬酸氢二铵，5g乙酸钠，2g磷酸氢二钾，0.58g硫酸镁，0.25g硫酸锰，1mL吐温80，用去离子水补至1L；继续添加20g琼脂粉得到固体培养基；
针对酿酒酵母所用的活化及发酵培养基均为YPD培养基，其配方为：20g葡萄糖，20g酵母浸粉，20g蛋白胨，用去离子水补至1L；
针对实验材料的灭菌条件均为：115℃灭菌20min；
具体包括以下步骤：
(1)酿酒酵母培养：将酿酒酵母(Saccharomyces cerevistae)S288c ATCC 204508接种于YPD培养基中，30℃、150rmp条件下培养12小时，进行菌种复苏；将活化菌株再次接种于新鲜YPD培养基中，培养10小时，通过血球计数板计数来确定酿酒酵母菌种量；在计数板上选取5个不同位置的方块分别统计酵母菌的个数，再4×105CFU/mL来确定酵母菌接种量；
(2)植物乳杆菌培养：将植物乳杆菌接种于MRS培养基中，将其放在37℃静置恒温培养箱中活化培养12小时，通过平板计数法来确定植物乳杆菌菌接种量；取活化培养12小时的1mL菌液进行10倍梯度稀释，将每个10倍梯度稀释的菌液取100μL涂布于MRS平板，37℃静置培养24小时，选菌落数在30至300之间的平板进行计数，再按照1×108CFU/mL计算植物乳杆菌的接种量；
(3)按照确定的菌种量将植物乳杆菌和酵母接入YPD培养基中混合培养，然后放入恒温摇床内，30℃，150rpm条件下持续恒温发酵5-24小时。
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