[发明专利]一种检测PCV2抗体的方法

权利要求书

1.一种检测PCV2抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，合成纳米金：

将250ml的0.01％氯金酸溶液置于双颈瓶中，加热至沸腾，搅拌下加入10mL 1％的柠檬酸三钠溶液，溶液颜色由无色逐渐变成蓝色最后变为酒红色后，继续加热至沸腾10min，移去热源，继续搅拌直至溶液冷却至室温，用0.22μm滤膜过滤，收集滤液，4℃避光保存备用；

步骤二，合成检测探针：

取上述制备的纳米金滤液200µL，调节其pH为9.0后与浓度为0.02 mg/mL的 HRP-羊抗猪IgG 12µL混匀，室温孵育30 min；加入同体积的0.2g/mL BSA溶液封闭30min，离心15min去除多余的抗体和BSA，沉淀物用220 µL的抗体稀释液重悬洗涤一次，再用抗体稀释液将其稀释10倍待用；

步骤三，PCV2抗体检测：

①包被：用pH 9.6的抗体稀释液将PCV2抗原稀释至2.5 µg/mL，加入96孔酶标板每孔100µL 4℃过夜，用洗涤液洗涤3次，每次3min；

②封闭：在酶标板的每孔加入250µL新配好的1% BSA封闭，置于37℃孵育2h，用洗涤液洗涤3次，每次3min；

③加样：将待测血清100µL加入上述已包被的孔中，并置于37℃孵育1h，用洗涤液洗涤3次，每次3min；

④加检测探针：取步骤二合成的检测探针100µL加入反应孔中，并置于37℃孵育1h，用洗涤液洗涤3次，每次3min；

⑤显色：在上述各反应孔中加入100µLTMB底物显色试剂，室温闭光孵育20min；

⑥终止反应：于上述各反应孔中加入100μL 2M H₂SO₄终止反应；

⑦检测：于酶标仪检测450 nm处吸光度值。

2.如权利要求1所述的检测PCV2抗体的方法，其特征在于，步骤三中所述的抗体稀释液为0.1 M Na₂CO₃/NaHCO₃缓冲液。

3.如权利要求1所述的检测PCV2抗体的方法，其特征在于，所述洗涤液为0.5% PBST。