[发明专利]一种急性肺损伤肠道菌群多样性的分析方法

说明书

本发明公开了一种急性肺损伤肠道菌群多样性的分析方法，涉及急性肺损伤肠道菌群多样性的分析技术领域，具体为一种急性肺损伤肠道菌群多样性的分析方法，包括以下步骤：S1、收集样本；S2、样本DNA抽提；S3、PCR扩增；S4、数据信息分析：S401、有效序列统计；S402、有效序列长度分布统计；S403、OUT聚类及物种信息标注；S404、多样性指数；S405、宏基因组测序分析。该急性肺损伤肠道菌群多样性的分析方法通过对急性肺损伤肠道菌群多样性能够有效的得到病患的详细具体数值，与标准数据值对比，能够有效的判断出病患肺部的详细情况，以及可开具详细表格备案，从而能够有效的根据病患肺部情况针对性治疗。

技术领域

本发明涉及急性肺损伤肠道菌群多样性的分析技术领域，具体为一种急性肺损伤肠道菌群多样性的分析方法。

背景技术

急性肺损伤是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容积减少、肺顺应性降低、通气/血流比例失调为病理生理特征，临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫，肺部影像学上表现为非均一性的渗出性病变，其发展至严重阶段(氧合指数200)被称为急性呼吸窘迫综合征。

肠道微生态环境中生存着细菌、真菌、病毒、原虫等100万亿的微生物，其中有100余种都为细菌，统称为肠道菌群。它们具有合成维生素、蛋白质、免疫激活、抗肿瘤以及解毒和清理肠道内环境的作用。一般情况下，肠道菌群与人体和外部环境保持着一个平衡状态，对人体的健康起着重要作用，但是这种平衡在某些情况下，可被打破，形成肠道菌群失调，表现为肠道菌群在种类、数量、比例、定位和生物学特性上的变化。

现有的肠道菌群多样性的分析不具备针对性，容易产生数据误差，从而导致对病患急性肺损伤的判断精度下降的缺点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种急性肺损伤肠道菌群多样性的分析方法，解决了上述背景技术中提出现有的肠道菌群多样性的分析不具备针对性，容易产生数据误差，从而导致对病患急性肺损伤的判断精度下降的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种急性肺损伤肠道菌群多样性的分析方法，包括以下步骤：

S1、收集样本：将急性肺损伤病人的粪便排泄至干净的容器中，以及用棉签粘取少量放置入含有无菌生理盐水的试管内部，盖上盖子密封，将试管放置入医用冷柜内，冷藏24小时，使得菌群稳定，不发生改变；

S2、样本DNA抽提：将步骤S1、收集样本中的试管送达至样本提取处，提取DNA模板；

S3、PCR扩增：提取步骤S2、样本DNA抽提中细菌基因组DNA模板，PCR产物包含待测区域、测序引物、特异性引物、区分样本的Barcode和测序仪，利用特异性引物扩增16srDNA的V4区域，样本扩增后，采用琼脂糖凝胶电泳检测产物的纯度和特异性，应在相应片段大小位置出现一条清晰且明显的主条带，在其它位置不应有任何明显杂带，并进行精确定量和纯化回收，根据仪器的使用说明，进行标本的测序，产出数据。

S4、数据信息分析：

S401、有效序列统计；

S402、有效序列长度分布统计；

S403、OUT聚类及物种信息标注；

S404、多样性指数；

S405、宏基因组测序分析。

可选的，所述步骤S1、收集样本中，无菌生理盐水为80-100ml。