[发明专利]一种高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.根据权利要求1所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM-05，其特征在于：该枯草芽孢杆菌AM-05菌株是在感染赤霉病的小麦田间土壤中分离筛选发酵得到。

2.根据权利要求1所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM-05，其特征在于，该菌株的制备具体方法如下：

（一）菌种的筛选

（1）取感染赤霉病的小麦田间土壤，铲去表层5cm，取5～15cm处，用无菌器具采样，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，采样后分离，振摇20-25min，使土样与水充分混合，将细胞分散，放入盛有99ml无菌水三角瓶中，常压80度的水浴处理样品1小时后，取出；

（2）用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，重复步骤，制成10^-2、10^-3、10^-4、10^-5不同稀释度的土壤溶液；

然后用无菌吸管分别由10^-3、10^-4、10^-5三管土壤稀释液中各吸取 0.2ml，滴在对应平板培养基表面中央位置，用无菌涂布器涂布，在室温下静置5-10min，使菌液浸入培养基；

（3）将步骤（2）的平板培养基倒置于30℃培养箱中培养1-3d；

（4）观察菌落表面粗糙不透明，呈污白色或微黄色，将这样的菌种单个菌落分别挑取少许细胞接种到种子培养基上，置于30°C的培养箱中培养，即得到待选的菌株；

（5）对待选的菌株进行筛选，检测其呕吐毒素降解能力，筛选得到降解能力最高的菌株；

（6）将菌种培养物支撑30%甘油管，放置在-80℃冰箱内保藏，待用；

（二）菌种的发酵

取分离出的枯草芽孢杆菌AM-05，经逐级发酵，加入15吨发酵罐，发酵48小时，喷雾干燥，得500亿/克左右的枯草芽孢杆菌AM-05产品。

3.根据权利要求2所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM-05，其特征在于：所述步骤（2）中培养基的配置方法：蛋白胨：10-13g，酵母膏：4-5g，NaCl：9-12g，可溶性淀粉：1-2g，琼脂：18-20g，用蒸馏水定容至900-1000mL，pH值为7.2-7.6，封口后，于120-125℃，高压灭菌21-23min。

4.根据权利要求2所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM-05，其特征在于：所述步骤（4）中培养基的配置方法：豆饼粉：10-13g，玉米粉:1-3g，Na₂HPO₄：2-3g，(NH₄)₂SO₄:0.8-1.2g，NH₄Cl：0.5-1g，用蒸馏水定容至900-1000mL，封口后，于120-123℃，高压灭菌20-22min。

5.根据权利要求2所述的高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌AM-05，其特征在于：所述步骤（二）逐级发酵时所需的发酵培养基按质量百分比计包括以下组分：豆饼粉：70-80%，玉米粉:5-10%，Na₂HPO₄：1-2%，(NH₄)₂SO₄：0.5-1%，NH₄Cl:0.5-1%1g，CaCl₂:1-2%，α—淀粉酶：1-2%，以上各组分之和为100%。

6.根据权利要求1-5中任一权利要求所述的枯草芽孢杆菌AM-05在降解呕吐毒素中的应用，其特征在于：先将枯草芽孢杆菌AM-05加入修饰膨润土中，再加入酵母细胞壁，即可得呕吐毒素专用脱毒剂呕吐灵，然后将脱毒剂呕吐灵与被呕吐毒素污染的饲料混合；

按质量百分比计：枯草芽孢杆菌AM-05：10-30%，修饰膨润土：40-60%，酵母细胞壁：5-15%，以上各组分之和为100%。