[发明专利]一种清肺排毒汤组方中药材的解析方法

权利要求书

1.一种清肺排毒汤组方中药材的解析方法，其特征在于，

采用清肺排毒汤中单味饮片的指标成分鉴定除矿物药生石膏之外的20味组方中药材：

取待分析的清肺排毒汤或颗粒，稀释或浓缩至浓度为以饮片质量计20 mg/mL的溶液，采用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）对溶液进行分析，在得到的清肺排毒汤或颗粒质谱数据中提取组方中各个药材的指标成分信息；

若提取到该组方中某一药材的所有指标成分，则认为待分析的清肺排毒汤或颗粒在制备时添加了组方中规定的此药材；否则，认为其在制备时未曾添加此药材；

所述提取到该组方中某一药材的所有指标成分是指：

当饮片的指标成分为二种及以上时，每个饮片的指标成分需同时存在才能判定清肺排毒汤中真的含有该饮片；

除矿物药生石膏之外的20种饮片的指标成分如下：

麻黄碱、伪麻黄碱、儿茶素、表儿茶素、去甲基麻黄碱、去甲基伪麻黄碱这6个成分为清肺排毒汤中麻黄的指标成分；

甘草苷、异甘草苷、甘草酸、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷这5个成分为清肺排毒汤中甘草的指标成分；

苦杏仁苷、野黑樱苷这2个成分为清肺排毒汤中杏仁的指标成分；

黄芩素、汉黄芩苷、黄芩黄酮I、黄芩黄酮II这4个成分为清肺排毒汤中黄芩的指标成分；

反式邻羟基桂皮酸、负离子模式下质荷比为415.1254的化合物、负离子模式下质荷比为429.1406的化合物这3个成分为清肺排毒汤中桂枝的指标成分；

柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2这2个成分为清肺排毒汤中柴胡的指标成分；

astin A、astin C、astin G、asterin A这4个成分为清肺排毒汤中紫菀的指标成分；

金丝桃苷、克氏千里光碱这2个成分为清肺排毒汤中冬花的指标成分；

芒果苷、异芒果苷、射干苷这3个成分为清肺排毒汤中射干的指标成分；

毛蕊花糖苷、蒙花苷、紫葳新甘II这3个成分为清肺排毒汤中藿香的指标成分；

枸橼苷、负离子模式下质荷比为371.0628的化合物这2个成分为清肺排毒汤中枳实的指标成分；

natsudaidain-3-O-(5-α-glucosyl-HMG)-β-glucoside、单羟基五甲氧基黄酮醇3-O-(5-α-葡糖基-HMG)-β-葡糖苷、7,4-dihydroxy-5,6,8,3-tetramethoxyflavonol-3-O-(5-α-glucosyl-HMG)-β-glucoside这3个成分为清肺排毒汤中陈皮的指标成分；

苍术苷A为清肺排毒汤中白术的指标成分；

正离子模式下质荷比为506.2313的化合物为清肺排毒汤中细辛的指标成分；

正离子模式下质荷比为712.8736的化合物为清肺排毒汤中姜半夏的指标成分；

6-姜烯酚和6-姜酚这2个成分为清肺排毒汤中生姜的指标成分；

尿囊素、正离子模式下质荷比为460.2402的化合物这2个成分为清肺排毒汤中山药的指标成分；

23-乙酰泽泻醇C、负离子模式下质荷比为557.3096的化合物这2个成分为清肺排毒汤中泽泻的指标成分；

猪苓酮A为清肺排毒汤中猪苓的指标成分；

正离子模式下质荷比为558.2777的化合物、正离子模式下质荷比为517.2987的化合物、负离子模式下质荷比为497.3264的化合物这3个成分为清肺排毒汤中茯苓的指标成分；

所述的指标成分的获取过程包括以下步骤：

（1）清肺排毒汤的制备：取饮片麻黄9质量份、炙甘草6质量份、杏仁9质量份、生石膏15质量份、桂枝9质量份、泽泻9质量份、猪苓9质量份、白术9质量份、茯苓15质量份、柴胡16质量份、黄芩6质量份、姜半夏9质量份、干姜9质量份、紫菀9质量份、冬花9质量份、射干9质量份、细辛6质量份、山药12质量份、枳实6质量份、陈皮6质量份、藿香9质量份，混合得合计196质量份处方剂量的饮片混合，加2000质量份的纯水，浸泡30-40 min，加热至沸，煎煮20-30min，收集药液；继加1600质量份纯水，加热至沸，煎煮15-20 min；合并煎液，过200目滤布，冷却至室温，以饮片质量计煎液稀释至20 mg/mL，获得清肺排毒汤提取液；

（2）单味饮片的提取：分别称取麻黄9质量份、炙甘草6质量份、杏仁9质量份、桂枝9质量份、泽泻9质量份、猪苓9质量份、白术9质量份、茯苓15质量份、柴胡16质量份、黄芩6质量份、姜半夏9质量份、生姜9质量份、紫菀9质量份、冬花9质量份、射干9质量份、细辛6质量份、山药12质量份、枳实6质量份、陈皮6质量份、藿香9质量份，分别加2000质量份的纯水，浸泡30-40 min，加热至沸，煎煮20-30 min，收集药液；继加1600 质量份纯水，加热至沸，煎煮15-20min；合并煎液，过200目滤布，冷却至室温；以饮片质量计分别浓缩至20 mg/mL，或减压浓缩至干后，以饮片质量计用纯水复溶至20 mg/mL，分别获得除矿物药生石膏之外的20味饮片的提取液；

（3）提取液的分析：采用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）分别分析步骤（1）和（2）中的提取液；

（4）组方饮片中各组分的指标成分鉴定：利用步骤（1）和（2）中提取液的高分辨质谱的精确分子量和特征碎片信息，获取组方中除矿物药生石膏之外的20味饮片的指标成分；所述的UPLC-Q-TOF-MS/MS方法为：色谱柱为反相C18色谱柱，柱温为20℃-45℃，流速为0.2mL/min-0.6 mL/min，流动相 A 为甲醇，流动相 B 为体积浓度 0.2%甲酸/水溶液，

洗脱梯度为 0-13 min， 5%-90%A；质谱离子源为电喷雾离子源（ESI），离子源参数如下：干燥气温度300-350℃，干燥气流速5-15 L/min，雾化气压力30-50 psi，鞘气温度300-400℃,鞘气流速：5-15 L/min，正离子模式下毛细管电压3000-4000 V，负离子模式下毛细管电压2500-3500V，碎裂电压50-150 V，碰撞电压20-80 V，一级质量扫描范围m/z 100~1200，二级质量扫描范围m/z 50~1100。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中指标成分的定义为：分为两种，一种是该单味饮片和清肺排毒汤中均含有、除此单味饮片之外的其余饮片中不含有的成分，其存在与否可以用来判断复方中是否含有该饮片；另一种是该单味饮片的特征性成分，即使该特征性成分在除此单味饮片之外的其余饮片中也存在，也可以作为组方中该单味饮片鉴定的辅助成分，当辅助成分不存在时，即使第一种成分存在，也不能证明组方中含有该单味饮片；将这两类成分共同作为组方中饮片鉴定的指标成分，可以用指标成分的精确分子量和特征碎片信息来识别清肺排毒汤中是否含有该饮片。