[发明专利]一种基于Cytb基因序列的飘鱼和寡鳞飘鱼的分子鉴别方法

权利要求书

1.一种飘鱼和寡鳞飘鱼的分子鉴别方法，其特征在于：包含以下步骤，

（1）分别提取待鉴定的飘鱼和寡鳞飘鱼基因组DNA；

（2）以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增飘鱼和寡鳞飘鱼的细胞色素b基因Ctyb，上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示；

（3）扩增产物纯化后，直接测序，飘鱼的Cytb基因扩增产物如SEQ ID NO.3所示, 寡鳞飘鱼的Cytb基因扩增产物如SEQ ID NO.4所示; Cytb基因第57位点碱基是C的为飘鱼，若该位点是T的为寡鳞飘鱼。

2.根据权利要求1所述的飘鱼和寡鳞飘鱼的分子鉴别方法，其特征在于：所述的PCR的反应体系为50 mL： 100ng/μL的模板DNA 1 mL，PCR缓冲液 5 mL，dNTP混合液4 mL，每种dNTP 0.1mmol/L， 10 μmol/L的上、下游引物各1 mL，2mL 2.5 IU的Taq酶；双蒸水36mL；所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0， 0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01%（g/100ml）明胶组成；PCR扩增反应程序为：94 ℃预变性4 min，94 ℃变性40 s，56 ℃退火50s，72 ℃延伸90 s，经30个循环后再72 ℃延伸10 min。

3.一种用于飘鱼和寡鳞飘鱼的分子鉴别的引物对，其特征在于：上游引物的序列如SEQID NO.1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示。

4.权利要求3所述的引物对在分子遗传鉴别飘鱼和寡鳞飘鱼中的应用。

5.权利要求3所述的引物对在制备飘鱼和寡鳞飘鱼分子鉴别试剂中的应用。

6.一种飘鱼和寡鳞飘鱼分子鉴别试剂，其特征在于：包含权利要求3所述的引物对。

7.根据权利要求6所述的飘鱼和寡鳞飘鱼分子鉴别试剂，其特征在于：所述的飘鱼和寡鳞飘鱼分子鉴别试剂还包括PCR缓冲液和dNTP混合液，所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0， 0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01%明胶组成。