[发明专利]一种牙龈卟啉单胞菌的取样方法及其应用

说明书

本发明涉及微生物培养技术领域，公开了一种牙龈卟啉单胞菌的取样方法及其应用，其中，牙龈卟啉单胞菌的取样方法包括以下步骤：取出液体培养基进行厌氧预平衡处理；取出无菌牙线棒；将无菌牙线棒的牙线嵌入人的牙缝间，在牙龈处往返拉动至少两次；取出牙线，将牙线的纤维线剪掉并浸入已经过厌氧预平衡处理的TSB液体培养基中；采用无菌枪头吹打数次浸有纤维线的TSB液体培养基，完成取样。本发明提供的牙龈卟啉单胞菌的取样方法简单、快捷，不依赖特殊设备器材，无创无痛，不会加剧牙龈出血，也不会增加感染风险，并且也能够从健康个体中取到样本。

技术领域

本发明涉及一种微生物培养技术领域，尤其涉及一种牙龈卟啉单胞菌的取样方法及其应用。

背景技术

牙龈卟啉单胞菌是一种革兰氏阴性、产黑色素的专性厌氧拟杆菌，经常在牙周疾病患者的口腔中检出，因此被认为是牙周疾病最重要的可疑致病菌之一。近年研究表明，其存在也与全身多系统疾病关系密切。流行病学研究表明，牙龈卟啉单胞菌可在牙周袋、龈沟、齿间、舌面、牙龈等部位检出，唾液、口腔脱落细胞中也有存在。此外，牙龈卟啉单胞菌存在多种克隆株，不同国家、地区和种族个体分离的牙龈卟啉单胞菌菌株间的生物学性状存在一定的差异，同一个体在不同牙周状态时，其牙周袋内存在的同种细菌可能属于不同毒力的克隆型。在我国，对牙龈卟啉单胞菌的研究多集中在该菌标准菌株(ATCC 33277)与致病的关系，而对中国人群口腔中牙龈卟啉单胞菌临床菌株的生物学特性的研究则少有报道。

目前，主要从慢性牙周炎、根尖周炎等患者中对口腔牙龈卟啉单胞菌进行取样，常采用纸尖吸附法、龈下刮治器收集法。纸尖吸附法使用最为普及，常使用无菌滤纸条插入牙周袋内，利用纸条吸附作用，获得龈下菌斑或龈沟液；龈下刮治器收集法一般选取患者磨牙区牙周袋最深位点取样，用无菌挖匙去除龈上菌斑，然后用无菌龈下刮治器收集牙龈底部的龈沟液或菌斑。这两种取样方法有以下局限性：(1)均需要特定器材的辅助；(2)要深入牙周袋内取样，对于牙周袋不明显的个体，可操作性不强；(3)操作中需要拨开牙龈使取样部位充分暴露，易造成受试者的不适；(4)对炎症部位的操作，会加剧牙龈出血，从而加剧感染。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种牙龈卟啉单胞菌的取样方法，以解决现有技术中取样受牙周袋状态限制、取样繁琐、需要特定器材辅助以及增加患者感染风险等问题。

本发明的第一个目的采用如下技术方案实现：一种牙龈卟啉单胞菌的取样方法，包括以下步骤：

取出TSB液体培养基进行厌氧预平衡处理；

取出无菌牙线棒；

将无菌牙线棒的牙线嵌入人的牙缝间，在牙龈处往返拉动至少两次；

取出牙线，将牙线的纤维线剪掉并浸入已经过厌氧预平衡处理的TSB液体培养基中；

采用无菌枪头吹打数次浸有纤维线的TSB液体培养基，完成取样。

进一步地，将所述牙线嵌入人的第三磨牙和第四磨牙之间的牙缝中进行取样。

进一步地，将所述牙线在牙龈处往返拉动2～4次。

进一步地，将牙线的纤维线剪掉并浸入100～200μL已经过厌氧预平衡处理的TSB液体培养基中。

进一步地，其特征在于，将所述牙线嵌入健康人或者牙周炎患者的牙缝间进行取样。

进一步地，对所述TSB液体培养基进行厌氧预平衡处理的厌氧条件为85％N₂、5％H₂和10％CO₂。

进一步地，所述TSB液体培养基由重量组分为30份的TSB和5份的酵母提取物加入到1L的无菌水中配制而成。

本发明的第二个目的在于提供一种上述的牙龈卟啉单胞菌的取样方法在原代分离筛选牙龈卟啉单胞菌方面的应用。