[发明专利]一种以太白贝母鳞茎为外植体的组织培养方法

权利要求书

1.一种以太白贝母鳞茎为外植体的组织培养方法，其特征在于：包括下述步骤：

（1）外植体表面灭菌

选择3-4年生健康无损伤的太白贝母鳞茎，将太白贝母鳞茎外层的鳞瓣掰开并冲洗干净；将冲洗干净的鳞瓣在超净工作台内进行表面灭菌；

表面灭菌具体过程为，先用75%酒精处理10-20s，然后用无菌蒸馏水冲洗2次，随后再用0.1%升汞处理10-15min，最后用无菌蒸馏水冲洗3次；

（2）初代培养；

将经过步骤（1）处理后的鳞瓣切成绿豆大小的小块，并接种至初代培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养60天；培养温度为20±2℃，光照时间为12 h/d，光照强度为1900-2100Lx；培养60天后，诱导出无菌鳞球茎；

所述初代培养基由MS培养基、激素、蔗糖和琼脂组成；其中，

所述激素为NAA和6-BA，或者NAA和ZT；

所述激素为NAA和6-BA时，所述NAA的添加量为3.0 mg/L；所述6-BA的添加量为0.5-2.0mg/L；

所述激素为NAA和ZT时，所述NAA的添加量为3.0 mg/L；所述ZT的添加量为0.5-1.0 mg/L；

所述蔗糖的添加量为25-35g/L；

所述琼脂的添加量为5-10g/L；

（3）增殖培养

将步骤（2）所诱导出的无菌鳞球茎切成绿豆大小的小块，并接种至增殖培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养40天；培养温度为20±2℃，光照时间为12 h/d，光照强度为1900-2100Lx；培养40天后，诱导出无菌鳞球茎；

所述增殖培养基由MS培养基、激素、蔗糖、琼脂以及香蕉粉和/或土豆泥组成；其中，

所述激素为NAA和ZT，或者为NAA和6-BA；

所述激素为NAA和ZT时，所述NAA的添加量为0.5-3 mg/L,所述ZT的添加量为0.5 mg/L；

所述激素为NAA和6-BA时，所述NAA的添加量为1.5-3mg/L, 所述6-BA的添加量为0.5mg/L；

所述蔗糖的添加量为20-40g/L；

所述琼脂的添加量为5-10g/L；

所述香蕉粉的添加量为20-60g/L；

所述土豆泥的添加量为20-60g/L；

（4）诱芽培养

将步骤（3）中诱导出的无菌鳞球茎从组织块上分离下来，并接种至诱芽培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养50天；培养温度为20±2℃，光照时间为12h/d，光照强度为1900-2100Lx；培养50天后，诱导出无菌芽；

所述诱芽培养基由MS培养基、激素、蔗糖和琼脂组成；其中，

所述激素为NAA和ZT；所述NAA的添加量为0.5-1 mg/L，所述ZT的添加量为1-2 mg/L；

所述蔗糖的添加量为20-40g/L；

所述琼脂的添加量为5-10g/L；

（5）生根培养

将步骤（4）中诱导出的无菌芽接种至生根培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养40天；培养温度为20±2℃，光照时间为12h/d，光照强度为1900-2100Lx；培养40天后，得到长出根系的太白贝母组培苗；

所述生根培养基由1/2MS培养基、激素、蔗糖和琼脂组成；其中，

所述激素为NAA和IBA；所述NAA的添加量为0.5-1mg/L，所述IBA的添加量为0.5mg/L；

所述蔗糖的添加量为20-40g/L；

所述琼脂的添加量为5-10g/L。

2.根据权利要求1所述的以太白贝母鳞茎为外植体的组织培养方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述初代培养基中，所述激素为NAA和ZT，所述NAA的添加量为3.0 mg/L，所述ZT的添加量为1.0 mg/L；所述蔗糖的添加量为30g/L；所述琼脂的添加量为7g/L。

3.根据权利要求1所述的以太白贝母鳞茎为外植体的组织培养方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述增殖培养基由MS培养基、激素、蔗糖、琼脂以及土豆泥组成；其中，所述激素为NAA和ZT，所述NAA的添加量为1.5 mg/L,所述ZT的添加量为0.5 mg/L；所述蔗糖的添加量为20g/L；所述土豆泥的添加量为20g/L；所述琼脂的添加量为7g/L。