[发明专利]一种过表达血管紧张素转换酶2的细胞系及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种细胞系，其特征在于，所述细胞系为非洲绿猴肾细胞VERO-E6-ACE2+，于2020年9月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2020191；

所述细胞系基因组中导入有血管紧张素转换酶2基因的表达序列；

所述血管紧张素转换酶2基因的表达序列的导入位点为基因组安全位，所述基因组安全位为AAVS1安全位点。

2.权利要求1所述的细胞系的制备方法，包括如下步骤：

（1）用引物PCR扩增得到血管紧张素转换酶2基因片段；

（2）将步骤（1）得到的血管紧张素转换酶2基因片段连接在质粒载体1中，得到模板质粒2；

（3）将模板质粒2转染至细胞内，加入嘌呤霉素孵育，即得；

其中，所述质粒载体1含有CMV启动子序列和AAVS1安全位点重组臂；

所述引物靶向血管紧张素转换酶2基因，所述引物的5’端均含有酶切位点和对应的保护碱基；

其中，所述酶切位点为XbaI和BstBI；所述引物的序列为：

上游引物F：5’-GCTCTAGAATGTCAAGCTCTTCCTGGCTC-3’；

下游引物R：5’-GCGCTTCGAACTAAAAGGAGGTCTGAACATC-3’。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述质粒载体1还含有Poly A信号序列和嘌呤霉素耐性基因序列，所述Poly A信号序列为bGH Poly A信号。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述模板质粒2的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

5.权利要求1所述细胞系在药物筛选中的应用，所述药物具有结合ACE2基因的能力或具有抑制ACE2表达的能力。

6.权利要求1所述细胞系在制备抗β冠状病毒制剂中的应用。