[发明专利]检测H1N1、RSV-A和ADV3的试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种针对H1N1,RSV‑A,ADV3的核酸适配体检测试剂盒，还提供了试剂盒的制备方法和应用。此试剂盒检测时具有操作简单、反应迅速、准确性高和灵敏度高的特点，可结合酶标仪、流式细胞仪、荧光显微镜等检测装置，就可以实现对于三种病毒的精确检测。试剂盒灵敏度较高、特异性好、测量范围宽、操作简单、可以同时检测三种病毒、有着良好的市场前景。

技术领域

本申请涉及生物体外检测，具体地说，本发明涉及同时检测H1N1,RSV-A,ADV3的试剂盒，制备试剂盒的方法，以及试剂盒在同时检测H1N1,RSV-A,ADV3样本中的应用。

背景技术

甲型H1N1病毒属于正粘病毒科(0rthomyxoviridae)，甲型流感病毒属(Influenzavirus A)，是一种单链RNA病毒。病毒颗粒呈圆球状，直径大约为80nm～120nm，具有囊膜。囊膜上有许多的放射状排列的突起糖蛋白，分别是血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(nneuraminidase,NA)和M2蛋白。根据其外部糖蛋白血凝素HA和神经氨酸酶NA的不同抗原特性可将甲型流感病毒分为多个亚型。目前可以造成人感染的流感病毒血清型主要有H1N1、H1N2和H3N2。甲型H1N1流感病毒主要通过呼吸道飞沫和接触传播的方式在人群之间进行传播，最早的有关H1N1流感病毒爆发的记录可以追溯到1918年西班牙大流感，在2009年包括墨西哥、美国和加拿大在内的许多国家都爆发了人感染甲型H1N1流感病毒的疫情，随之蔓延到全球各地，虽然疫情已经被有效的控制住，但是对于流感病毒的监测与研究仍旧需要被重视。

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus,RSV)是一种RNA病毒，属副黏液病毒科、肺病毒属，有一个血清型，分为A、B两种亚型。RSV病毒由病毒粒子和脂质包膜构成，包括2种基质蛋白(M1、M2)、3种核衣壳蛋白(N、P、L)、2种非结构蛋白(NS1、NS2)和三种跨膜蛋白(主要粘附蛋白G、融合蛋白F和小疏水蛋白SH)。RSV的主要感染对象为5岁以下的儿童以及婴幼儿，据报道称每年有超过3300万儿童感染RSV病毒，尤其是出生6个月以下的婴儿免疫功能尚不成熟，是严重感染和死亡的高发群体。RSV病毒主要传播方式为飞沫传播，其次是污染的手指直接接触到鼻粘膜和眼黏膜从而引起感染。近年来利用鼻咽分泌物脱落细胞及血清中IgM抗体的间接法免疫荧光技术，ELISA，碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法(APAAP)，生物素抗生物素ELISA法，辣根过氧化物酶—抗辣根过氧化物酶法(PAP)、单克隆抗体荧光法等都能进行合胞病毒感染的快速诊断。

腺病毒(Adenovirus,ADV)是一种无包膜的DNA病毒，主要在细胞核内进行复制，常引起人上呼吸道感染和眼部上皮细胞感染。腺病毒作为普通的机会性病原体长期存在于人群中，免疫功能低下的病人就有感染腺病毒的可能，在居住密集的人群中可引起急性发热性呼吸道疾病的爆发性流行。腺病毒主要通过呼吸道飞沫、眼分泌物经呼吸道或者接触传播；肠道感染主要通过消化道传播。目前对于腺病毒的检测依赖于疾病的类型和所获取的标本，一般采用病毒培养、抗原测定和基因组检测技术来进行病毒的检测。