[发明专利]一种基于VDBP/VSIG4的免疫负向调节多价疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基于VDBP/VSIG4的免疫负向调节多价疫苗及其制备方法，该疫苗为VDBP多价表位肽与VSIG4基因重组表达载体的复合物；VDBP1多价表位肽/VDBP2多价表位肽分别由表位VDBP211–219/VDBP 235–243与穿膜序列LWMRWYSPK和接头序列组成，穿膜序列位于氨基端，表位VDBP211–219/VDBP 235–243序列位于羧基端，表位与穿膜序列之间以接头序列连接；该疫苗可成通过穿膜序列进入细胞，有效促进1型糖尿病抗原表位VDBP1/VDBP2进入抗原递呈途径，进一步合成VSIG4蛋白，抑制VDBP特异性CD8+T细胞应答，达到降低免疫应答，从而延长1型糖尿病的病程进展。

技术领域

本发明涉及一种多价疫苗，特别涉及一种1型糖尿病的双靶向免疫负向调节多价疫苗，还涉及该疫苗的制备方法。

背景技术

近年来全球范围内糖尿病的患病率在逐年上升,最新流行病学调查显示,预计到2040年全球糖尿病患病总人数将达到6.42亿。糖尿病分型中以1型和2型两种较为常见，其中1型糖尿病(type 1diab T1DM)占糖尿病总数的10％～15％，它是一种在T淋巴细胞介导下，出现胰岛β细胞损伤、胰岛功能受损，导致胰岛素分泌绝对不足的自身免疫性疾病。在T1DM发病机制中,有遗传、饮食、环境等多种因素参。

维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,VDBP)为球蛋白,是一种58k Da糖蛋白, 作为血浆维生素D及其代谢物的主要载体蛋白,支持活性1,25-二羟维生素D[1,25(OH)2D] 及其前体25-羟维生素D[25(OH)D]的生物利用度,最重要的作用是维持维生素D的生物活性。VDBP作为25-(OH)VitD3/VDBP复合物被巨噬细胞介导的内吞作用重新吸收,并被近端小管上皮细胞分解代谢,有助于降低其尿排泄水平。最近相关研究表明,1型糖尿病(T1DM) 或2型糖尿病(T2DM)伴正常蛋白尿、微量蛋白尿、大量蛋白尿患者尿VDBP均增高。因此，VDBP有望成为1型糖尿病的相关抗原。

新近鉴定的B7家族相关蛋白VSIG4(V-set and immunoglobulin domain-containing4),又称为Ig超家族蛋白-39(Ig superfamily protein 39,Z39Ig)。VSIG4特异性的表达在组织巨噬细胞上,如腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PEMs)、肝Kupffer细胞。最初的研究表明,VSIG4 作为补体受体通过与其配体C3b/i C3b结合,介导经C3b调理的病原体的清除。Ⅰ型糖尿病(非肥胖性)小鼠模型中发现,VSIG4+巨噬细胞与糖尿病抵抗相关。另外,作为孤儿配体,VSIG4与 T细胞上的未知配体结合,抑制T细胞的增殖、活化及IL-2的产生。表明VSIG4可能在炎性病理损伤中传递抗炎信号。

由于细胞膜的屏障作用，生物大分子不能自由进入细胞。近年来，一些具有细胞膜穿透能力的小分子多肽相继被发现，其可有效携带外源性大分子进入细胞，并对宿主细胞没有显著毒副作用。这些具有细胞穿透能力的多肽被命名为细胞穿膜肽(CPP)。研究发现，LWMRWYSPK可有效促进与之偶联的外源表位进入MHC-Ⅰ类抗原递呈途径，表现为动力学显著增强，且该过程表现为蛋白酶体/TAP非依赖、氨基肽酶依赖。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种1型糖尿病的免疫负向调节多价疫苗，目的之二在于提供所述1型糖尿病的免疫负向调节多价疫苗的制备方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

1、1型糖尿病的免疫负向调节多价疫苗，其特征在于：该疫苗为VDBP1多价表位肽、VDBP2多价表位肽与VSIG4基因重组表达载体的的复合物；

所述VDBP1多价表位肽由穿膜序列LWMRWYSPK、接头序列：SYSY、糖尿病相关抗原VDBP蛋白CD8细胞表位VDBP 211–219：LLTTLSNRV组成；