[发明专利]一种用于检测过继性免疫细胞的引物探针组合物和试剂盒

权利要求书

1.一种引物探针组合物，其特征在于，

a)所述引物探针组合物的靶基因为慢病毒衣壳蛋白的编码基因；

b)所述引物探针组合物用于检测过继性免疫细胞，所述过继性免疫细胞是基于慢病毒载体转导基因而构建的。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述慢病毒衣壳蛋白的编码基因包括SEQ ID NO:1所示的核酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物包括SEQ ID NO:2～3所示的核酸序列；

优选地，所述探针包含SEQ ID NO:4所示的核酸序列；

优选地，所述探针的5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有淬灭基团；

优选地，所述荧光基团包括FAM、HEX、TET、JOE、CY3、VIC或CY5中的任意一种，优选为FAM；

优选地，所述荧光淬灭基团包括MGB、MGBNFQ、BHQ1、BHQ2或BHQ3中的任意一种，优选为MGBNFQ。

4.一种检测过继性免疫细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的引物探针组合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR预混液；

优选地，所述试剂盒还包括标准质粒；

优选地，所述标准质粒为CAR质粒，优选为CD19 CAR质粒；

优选地，所述CAR质粒的拷贝数为1×10⁸～1×10⁹copies/μL。

6.一种检测过继性免疫细胞的方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求4或5所述的试剂盒对样本DNA进行荧光定量PCR，根据标准曲线计算样本中慢病毒基因的拷贝数。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述样本包括心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、脑、子宫、睾丸、卵巢、附睾、胃、十二指肠、脂肪、骨骼肌、结肠、骨髓或血液中的任意一种或至少两种的组合。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的条件为93～98℃预变性20～40s；93～98℃变性5～10s，50～55℃退火10～20s，70～75℃延伸30～40s，30～40个循环；

优选地，所述标准曲线采用梯度稀释的CAR质粒构建。

9.根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)对拷贝数为1×10⁸～1×10⁹copies/μL的CAR质粒进行梯度稀释，采用权利要求4或5所述的试剂盒进行荧光定量PCR，条件为93～98℃预变性20～40s；93～98℃变性5～10s，50～55℃退火10～20s，70～75℃延伸30～40s，30～40个循环，构建标准曲线；

(2)从荷瘤小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、脑、子宫、睾丸、卵巢、附睾、胃、十二指肠、脂肪、骨骼肌、结肠、骨髓和血液中提取DNA，采用权利要求4或5所述的试剂盒进行荧光定量PCR，条件为93～98℃预变性20～40s；93～98℃变性5～10s，50～55℃退火10～20s，70～75℃延伸30～40s，30～40个循环；

(3)根据扩增结果和标准曲线计算得到荷瘤小鼠不同组织中CAR基因分布。

10.权利要求1-3任一项所述的引物探针组合物和/或权利要求4或5所述的试剂盒在基于慢病毒载体的过继性免疫细胞的药代动力学研究中的应用。