[发明专利]一种PDE6B核苷酸序列及其应用

说明书

本发明涉及生物医药基因治疗技术领域，公开了一种PDE6B核苷酸序列及其应用。本发明证实密码子优化后的PDE6B编码序列表达蛋白的效率要高于野生型序列，使用AAV2/2.7m8‑coPDE6B药物处理可以显著改善PDE6B突变导致视网膜色素变性的小鼠的视网膜病理症状以及达到视网膜功能的恢复。注射AAV2/2.7m8‑coPDE6B药物，PDE6B可以在视网膜外核层高效表达并增加视网膜外核层厚度。视网膜电位图显示AAV2/2.7m8‑coPDE6B药物处理组的小鼠对刺激反应强烈。因此AAV2/2.7m8‑coPDE6B药物具有预防或治疗视网膜色素变性的作用。

技术领域

本发明涉及生物医药基因治疗技术领域，更具体的说是涉及一种PDE6B核苷酸序列及其应用。

背景技术

PDE6蛋白由PDE6A和PDE6B两个催化亚基以及两个抑制亚基组成。该蛋白能够调节视杆细胞受到光刺激时胞质中的cGMP水平,从而使视杆细胞膜超极化，最终产生受体电位。PDE6B突变会导致PDE6蛋白失活，光传导通路被破坏，胞质中的cGMP和钙离子水平急剧升高，引起细胞凋亡，造成视细胞退化。由于PDE6B在视杆细胞光传导通路中不可或缺，PDE6B基因突变会引发严重的视网膜色素变性病变，目前尚无行之有效的治愈方法。

天然存在的AAV血清型通常无法在玻璃体腔一侧转导视网膜组织细胞，因为存在内限膜、神经胶质细胞等阻止AAV病毒粒子扩散的屏障。通过构建AAV2衣壳蛋白编码序列文库，在loop4的位置插入随机7氨基酸序列，将突变的血清型注入小鼠玻璃体腔进行筛选，富集到一种主要的突变亚型，称为AAV2/2-7M8，即AAV2～588LALGETTRP。AAV2/2.7M8血清型具有很强的视网膜组织趋性，该血清型包装的荧光报告蛋白通过玻璃体腔注射小鼠眼部，能够在整个视网膜中检测到荧光。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种PDE6B核苷酸序列，使得所述核苷酸序列经过优化密码子使用偏好，DNA重复序列，mRNA二级结构，平衡序列中GC含量等多个参数，可以使PDE6B表达效率更高；

本发明的另外一个目的在于提供承载上述核苷酸序列的病毒载体，并具备预防或治疗PDE6B突变导致视网膜色素变性的作用；

本发明的另外一个目的在于提供包含上述病毒载体或核苷酸序列的药物制剂，并具备预防或治疗PDE6B突变导致视网膜色素变性的作用；；

本发明的另外一个目的在于提供上述核苷酸序列、病毒载体以及药物制剂在预防或治疗PDE6B突变导致视网膜色素变性领域的中相关应用，包括但不限于相关药品、试剂的制备以及预防或治疗方法中的应用；

本发明的另外一个目的在于提供上述药物制剂的递送方法，将所述药物制剂注射至眼部如视网膜下或玻璃体腔注射。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种PDE6B核苷酸序列，其与SEQ ID NO:3所示核苷酸序列有≥95％相同性。

作为优选，其与SEQ ID NO:3所示核苷酸序列有≥98％相同性；进一步优选地，其与SEQ ID NO:3所示核苷酸序列有≥99％相同性；在本发明具体实施方式中，其序列如SEQID NO:3所示。

作为优选，所述核苷酸序列为cDNA序列。

同时，本发明还提供了一种病毒载体，其包含有本发明所述核苷酸序列。

作为优选，所述病毒载体为腺相关病毒载体、慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺病毒载体；在本发明具体实施方式中，本发明采用腺相关病毒载体，所述腺相关病毒载体的血清型为AAV2野生型或AAV2/2.7M8。

更具体地，所述病毒载体由启动子CAG(序列如SEQ ID NO:4所示)调控PDE6B蛋白的表达。