[发明专利]天然除草剂thaxtomins的高产菌株及其制备方法和用途

权利要求书

1.一株天然除草剂thaxtomins的高产菌株，其特征在于，该菌株来源于S.albusJ1074，用neo基因替换掉cebR基因，同时含有thaxtomin生物合成基因簇，其中thaxtomin生物合成基因簇依次包括：P450单加氧酶txtC基因，MbtH-like蛋白txtH基因，非核糖体肽类合成酶txtB基因，非核糖体肽类合成酶txtA基因，P_rpoD启动子，正向调控因子txtR基因，P450单加氧酶txtE基因，一氧化氮合成酶txtD基因；所述P_rpoD启动子来源于小白链霉菌J1074。

2.如权利要求1所述天然除草剂thaxtomins的高产菌株，其特征在于，所述thaxtomin基因簇来源为疮痂链霉菌ATCC 49173。

3.如权利要求1所述天然除草剂thaxtomins的高产菌株，其特征在于，所述txtR的基因序列如SEQ ID NO:39所示。

4.如权利要求3所述天然除草剂thaxtomins的高产菌株，其特征在于，制备方法为，

thaxtomin基因簇的制备：PCR分别扩增得到SEQ ID NO:11-15所示的五个片段，通过酶切连接将其拼装成完整的thaxtomin基因簇，再通过λ-RED介导的同源重组将基因簇转换到链霉菌整合载体上，获得带有thaxtomin基因簇的重组质粒A；

cebR基因敲除的突变菌株的制备：通过温敏型质粒介导的同源重组双交换，将小白链霉菌 J1074 CGMCC 4.7233基因组中的cebR基因替换为卡那霉素抗性基因neo，获得cebR基因敲除的突变菌株J1074ΔcebR；

Thaxtomin生物合成基因簇的制备：将SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38,与线性化的pBluescript II KS(-)载体同源重组，得到含有SEQ ID NO:36,39,37和 38片段的重组载体B；然后将重组载体B上的SEQ ID NO:36,39,37和 38片段通过内切酶切下，再通过λ-RED介导的同源重组系统，将SEQ ID NO:36,39,37和 38片段与重组质粒A进行同源重组，获得带有thaxtomin生物合成基因簇的重组质粒C；

菌株的筛选：将重组质粒C通过链霉菌-大肠杆菌穿梭系统接合转移至突变菌株J1074ΔcebR中，通过安普霉素筛选突变株，最终获得thaxtomin的高产菌株。

5.权利要求1-4任一所述天然除草剂thaxtomins的高产菌株用于制备thaxtomins的用途。