[发明专利]鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒

说明书

本发明涉及一种鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该方法根据鸭丙型肝炎病毒基因组保守序列设计引物组：外引物(DUHCV‑F3和DUHCV‑B3)、内引物(DUHCV‑FIP和DUHCV‑BIP)和环引物(DUHCV‑LF和DUHCV‑LB)，具体序列分别见SEQ ID NO.1‑6。根据所设计的引物组建立一种鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该试剂盒检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高，无需昂贵仪器设备，便于基层临床现场使用，方便快速。

技术领域

本发明属于禽病学检测领域，具体涉及一种鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。

背景技术

根据国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy ofViruses)的最新分类，黄病毒科(Flaviviridae Family)下设4个病毒属：黄病毒属(Flavivirus)，有53个病毒种，有些是人畜共患病原体，如流行性乙型脑炎病毒、登革热病毒；丙型肝病毒属(hepacivirus)，有14个病毒种；Pegivirus病毒属，有11个种；瘟病毒属(Pestivirus)，有11个种，常见的如猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是属于黄病毒科、丙型肝炎病毒属的单股正链RNA病毒，其病毒粒子呈球形，直径约40-60nm，核衣壳呈二十四面体对称，核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。鸭丙型肝炎病毒(duck hepacivirus，DuHCV)是从患有产蛋异常现象的鸭群中新发现的一种丙型肝炎病毒，其基因组具有一般丙型肝炎的特征，为单股正链RNA，基因组长为11422bp，编码一个长度为10824bp的开放阅读框(open reading frame，ORF)，编码的多聚蛋白长为3607个氨基酸。由于鸭丙型肝炎病毒为新发传染病，对其开展流行病学调查显得尤为重要。

目前，病毒检测主要有酶联免疫法、PCR法、实时荧光定量PCR方法等基于核酸水平的检测方法。酶联免疫法是目前较常用的一种方法，但存在灵敏度不高和假阳性等缺点。灵敏度更高的PCR法、实时荧光定量PCR方法已成为常规检测手段，但由于实验设备要求比较高，在基层的检验检疫部门推广应用难。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermalamplification，LAMP)是应用4-6条特异性引物，通过BstDNA聚合酶，在水浴锅中对靶基因进行的一种恒温扩增技术，该技术具有扩增特异性强、灵敏度高、操作快速简便、检测简单等特点，摆脱了对PCR仪、实时荧光定量PCR仪等昂贵仪器的依赖，在基层单位的检测更加方便。相对于现有的其他核酸扩增技术，LAMP具有许多独特的优点：①LAMP技术扩增的特异性非常高，使用的特异性引物可以识别目的序列上特异性的区域，对目的序列具有高度的选择性，减少了非靶标序列的影响。②LAMP技术可以在等温条件下实现扩增，减少了对昂贵、精密实验仪器的要求，同时扩增效率高。仅需要普通水浴锅调节温度(60℃～65℃)，大大降低了检测的费用，特别适合基层和现场使用。③LAMP技术阳性扩增反应中会产生大量的类似花椰菜结构的产物和白色焦磷酸续沉淀，扩增产物的检测方法多样，可用凝胶电泳检测、直接用肉眼检测或在反应体系中加入荧光显色试剂，根据颜色的变化通过荧光照射装置进行紫外光照射检测进行分析。目前，还未见针对鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增(LAMP)反应方法的相关研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒，利用该引物组可以特异性的检测鸭丙型肝炎病毒，为基层和现场提供一种简便、快捷的检测鸭丙型肝炎病毒的方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种鸭丙型肝炎病毒环介导等温扩增检测引物组，其由外引物(DUHCV-F3和DUHCV-B3)、内引物(DUHCV-FIP和DUHCV-BIP)、环引物(DUHCV-LB和DUHCV-LF)组成，上述引物序列如下：