[发明专利]一种新型mariner转座子系统、应用和构建枯草芽孢杆菌插入突变株文库

权利要求书

1.一种新型mariner转座子系统，其特征在于：所述系统包含如下元件：

⑴已测序的mariner转座子，该转座子GenBank序列接收号为KJ933396；

⑵额外添加在步骤⑴中已测序的mariner转座子的ITR区域中的壮观霉素抗性基因spc；

⑶能在大肠杆菌细胞内复制的宿主复制起始区；

⑷能在枯草芽孢杆菌细胞内复制的温度敏感性质粒复制起始区；

⑸温度敏感性质粒的载体耐药性基因ermC。

2.根据权利要求1所述的新型mariner转座子系统，其特征在于：所述温度敏感性质粒复制起始区扩增于pE194质粒的温敏复制起始区pE194 ori^ts，能够使质粒在枯草芽孢杆菌细胞内复制，当培养温度超过42℃时，质粒丢失。

3.根据权利要求1所述的新型mariner转座子系统，其特征在于：所述能在大肠杆菌细胞内复制的宿主复制起始区扩增于pBR322质粒的复制起始区colE1 origin，能够使所述新型mariner转座子系统在大肠杆菌细胞内复制。

4.根据权利要求1所述的新型mariner转座子系统，其特征在于：所述已测序的mariner转座子扩增于pKKma质粒，包括转座酶基因tnpA，并在受转座酶识别的两个反向重复序列ITRs区域中额外添加了壮观霉素抗性基因spc。

5.根据权利要求1所述的新型mariner转座子系统，其特征在于：所述温度敏感性质粒的载体耐药性基因ermC来源于pMAD质粒。

6.根据权利要求1所述的新型mariner转座子系统，其特征在于：所述新型mariner转座子系统的元件的插入具有随机性，将新型mariner转座子系统命名为pZQ1902。

7.根据权利要求1所述的新型mariner转座子系统，其特征在于：所述已测序的mariner转座子的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

8.根据权利要求1至7任一项所述的新型mariner转座子系统，其特征在于：所述新型mariner转座子系统的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。

9.如权利要求1至8任一项所述的新型mariner转座子系统在枯草芽孢杆菌插入突变株文库的构建方面中的应用。

10.利用如权利要求1至8任一项所述的新型mariner转座子系统构建获得的枯草芽孢杆菌插入突变株文库，其特征在于：构建步骤如下：

将新型mariner转座子系统在大肠杆菌DH5α中构建成功后，转化到枯草芽孢杆菌中，培养含有新型mariner转座子系统的枯草芽孢杆菌，获得转化子30℃扩增培养后，得到枯草芽孢杆菌插入突变株文库。