[发明专利]从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法

说明书

一种从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法，具体步骤如下：（1）茶籽粕粉碎。（2）茶籽粕脱脂。（3）茶籽粕蛋白提取。（4）茶籽粕粗肽制备。（5）α‑葡萄糖苷酶抑制肽分离及筛选。（6）α‑葡萄糖苷酶抑制肽的结构鉴定。通过以上步骤，本发明制备了三种α‑葡萄糖苷酶抑制肽，其氨基酸序列依次为a（GHSLESIK）,b（GLTSLDRYK）以及c（SPGYYDGR），对α‑葡萄糖苷酶具有很高的抑制活性，在降血糖产品开发中具有很大应用前景。本发明所涉及的原料低廉且来源广泛、制备的α‑葡萄糖苷酶抑制肽活性高，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法，属于农产品精深加工技术领域。

背景技术

近年来，我国糖尿病人群不断增加。药物治疗是控制糖尿病的主要手段。长期以来，α-葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素以及一些双胍类的药物是我国最常见的降血糖药物。由于这类药物存在较大的副作用或需要体外注射等原因，在降血糖的过程中也增加了病人的痛苦。因此，尝试使用食疗的方式对糖尿病进行控制和治疗成为当前的研究热点。其中，具有降血糖作用的膳食性多肽，由于其来源广泛、种类繁多等原因，使其备受关注。

茶籽粕是茶油加工中的主要副产物，不仅价格低廉，而且富含蛋白质等成分，是膳食性多肽的理想来源之一。我们的研究表明，茶籽粕多肽的混合物虽然具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性，但并不清楚发挥主要作用的茶籽粕多肽的具体结构。这将制约茶籽粕来源的α-葡萄糖苷酶抑制肽的作用机理研究，进而影响其在降血糖药物开发中的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种从茶籽粕中提取得到降血糖肽的方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：将茶籽粕粉碎后得到茶籽粕粉末；

步骤2：将茶籽粕粉末与正己烷按照1：4-6的质量比混合，然后对混合液进行搅拌，接着抽滤除去正己烷，得到的粉末室温干燥后得到脱脂茶籽粕粉末；

步骤3：将脱脂茶籽粕粉末与水按1：7-15的质量比混合，然后后调节pH值到9.5-10.5，将混合物加热到45-60℃，然后搅拌1-2，接着以7000-9000r/min离心10-20min，得到的上清液调节pH值到4.0-4.5，1-2h后以7000-9000r/min离心14-20min，得到的沉淀用去离子水再悬浮，经冷冻干燥后得到茶籽粕蛋白；

步骤4：将茶籽粕蛋白分散于水中制得质量分数为2-4％的茶籽粕蛋白溶液，然后向所述茶籽粕蛋白溶液中添加碱性蛋白酶，在温度为50-60℃、pH值为9.0～11.0的条件下进行酶解，酶解结束后将反应体系的pH值调到7.0，并在沸水浴中加热10～15min进行灭酶；灭酶后的溶液以7000～12000r/min离心10～20min，得到的上清液即为茶籽粕多肽粗样；

步骤5：将茶籽粕多肽粗样，在工作压力0.1～0.2Mpa，工作温度0～40℃条件下，依次通过10KDa、5KDa和3KDa的超滤膜后收集到4个样品，经冷冻干燥后即得到10KDa的多肽组分、5-10KDa的多肽组分、3-5KDa的多肽组分和3KDa的多肽组分；

步骤6：分别测定10KDa的多肽组分、5-10KDa的多肽组分、3-5KDa的多肽组分和3KDa的多肽组分抑制α-葡萄糖苷酶的活性进行测定；

步骤7：对最高抑制率的多肽组分进行细分级分离；细分级分离分离方法包括：使用制备高效液相色谱法或半制备高效液相色谱法对步骤6筛选得到的最高抑制率的多肽组分进行分离，将含有0.1％TFA的乙腈用作洗脱液，流速设置为1L/min，在220nm处检测洗脱峰；然后浓缩挥发有机溶剂后冷冻干燥，对每个冻干组分的抑制α-葡萄糖苷酶的活性进行测定，筛选出抑制率最高的多肽组分；