[发明专利]一种基于纳米酶检测组蛋白乙酰转移酶的方法

说明书

本发明公开了一种基于纳米酶检测组蛋白乙酰转移酶的方法，属于纳米生物分析检测领域。本发明通过CuBisubgt;2/subgt;Osubgt;4/subgt;与Ksubgt;4/subgt;[Fe(CN)subgt;6/subgt;]原位反应生成具有模拟过氧化物酶活性的CuBisubgt;2/subgt;Osubgt;4/subgt;/Bisubgt;4/subgt;[Fe(CN)subgt;6/subgt;]subgt;3/subgt;，进行HAT p300的检测。本发明方法能灵敏检测0.3‑200 nmol/L范围内的HAT p300，检测限低达0.09 nmol/L，具有非常优异的应用前景。

技术领域

本发明属于纳米生物分析检测领域，具体涉及一种基于纳米酶检测组蛋白乙酰转移酶的方法。

背景技术

组蛋白乙酰化是调节基因转录的关键因素之一，并参与真核基因表达和其他重要的生命过程以及其它翻译后修饰的过程[Peterson C.L.；Laniel M.A.Curr.Biol.2004,14,R546–R551]。而组蛋白乙酰转移酶(HAT)充当组蛋白乙酰化的催化酶，使用乙酰辅酶A作为乙酰基供体，将乙酰基转移至底物肽，同时产生大量副产物辅酶A。已有证据表明，组蛋白乙酰转移酶水平与多种人类疾病的发生有密切关系，例如癌症，白血病，老年痴呆症，艾滋病和心血管疾病等[Han Y.；Li H.Anal.Chem.2015,87,9179-9185]。因此开发简单、快速、灵敏和选择性检测组蛋白乙酰转移酶的方法具有重要意义。到目前为止，已报道一些用于组蛋白乙酰转移酶检测的方法，包括放射性同位素标记[Turlais F.；HardcastleA.Anal.Biochem.2001,298,62-68]，电化学发光[Chen H.；Liu X.BiosensBioelectron.2019,126,535-542]，酶联免疫吸附测定(ELISA)[Kuninger D.；LundbladJ.J.Biotechnol.2007,131,253-260]，比色法[Zhen Z.；Tang L.J.Anal.Chem.2012,84,3614-3620]荧光法[Ghadiali J.E.；Lowe S.B.Angew.Chem.Int.Ed.2011,50,3417-3420]等。然而，传统的放射性同位素标记方法具有放射性危害，费时且标记过程成本高等不足。对于ELISA和比色法等基于抗体的识别技术来说，存在不同批次的抗体之间的差异，抗体标记成本高以及探针制备过程复杂等缺点。而荧光法则需要昂贵的仪器和复杂的荧光标记过程。因此，迫切需要开发一种低成本，高效且灵敏的组蛋白乙酰转移酶检测方法。

近年来，基于纳米材料的分析方法具有快速、灵敏以及易微型化等诸多优点引起了广泛的关注。纳米酶是一类具有酶活性的纳米材料，由于其稳定性好，酶活性高且容易调节、成本低等特点同样受到了研究人员的密切关注[Wei H.；Wang E.Chem.Soc.Rev.2013,42,6060–6093；Lin Y.H.；Ren J.S.Acc.Chem.Res.2014,47,1097–1105]。目前基于纳米材料的纳米酶在生物传感[Anjani P.Nagvenkar.；Aharon Gedanken.ACSAppl.Mater.Interfaces.2016,8,22301-22308；Jeonghyo Kim.ACSAppl.Mater.Interfaces.2018,10,12534-12543]，疾病诊断和治疗[Mu X.Y.；WangJ.Y.ACS Nano,2019,13,1870-1884]以及污染物降解[Li S.Q.；Hou Y.J.ACSAppl.Mater.Interfaces.2020,12,2581–2590]等领域得到了越来越多的应用。但是，其在组蛋白乙酰转移酶的检测方面的应用尚未报道。

发明内容

本发明发现了一种新型的CuBi₂O₄/Bi₄[Fe(CN)₆]₃纳米酶，并首次将纳米酶用于组蛋白乙酰转移酶(HAT p300)的比色法测定。