[发明专利]一种离体诱导桃单倍体染色体加倍的方法

说明书

本发明公开了一种离体诱导桃单倍体染色体加倍的方法。本发明所提供的离体诱导桃单倍体染色体加倍的方法为浸泡法或培养基法。所述浸泡法包括：将桃单倍体组培苗茎段置于浓度为1000‑5000mg/L的秋水仙素溶液中浸泡处理1‑4天。所述培养基法包括：将桃单倍体组培苗茎段接种在含终浓度为500‑2000mg/L秋水仙素的培养基中共培养1‑4周。实验证明，利用本发明建立的离体诱导桃单倍体染色体加倍技术能够高效得到纯合二单倍体，本发明为桃遗传学研究及加速育种进程奠定了坚实的基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种离体诱导桃单倍体染色体加倍的方法。

背景技术

桃原产我国，是世界上栽培最为广泛的温带果树之一，目前栽培桃的国家和地区达70多个，是重要的经济树种。中国是世界上产桃最多的国家。它的染色体数目少(2n＝16)，基因组小，约为230MB，只有拟南芥基因组的两倍，加之其能够自交结实，实生苗开始结果早，育种周期短，世代交替快，品种类型多，基因资源丰富，是最适合进行遗传学研究的多年生果树种类。世界范围内种植的桃新品种获得的主要途径是常规杂交育种，育成的众多桃、油桃和蟠桃等系列品种在生产中得到了广泛应用。随着人们的生活水平不断提高，品种的更换速度也越来越快，农业生产对新品种的要求也越来越高。单纯依靠常规技术选育作物新品种，周期长、效率低，已不能满足当前生产对品种的需求；育种手段由传统常规技术向现代高效技术转变已是大势所趋。

现有的桃品种均为高度杂合的二倍体，很难由此作出较为准确的遗传分析结果。因此，获得纯合二单倍体有着非常重要的意义。桃单倍体植株是育种和遗传规律研究的良好材料。由于单倍体的基因没有等位基因，所以单倍体植株的每一个基因，无论显性基因或隐性基因都要表现出对性状发育的作用，因而它是研究桃基因定位、基因性质和基因作用表达的良好材料。桃单倍体多数来自于杂种实生，且杂种实生苗中出现单倍体的几率仅约为1/1000。因此，每一株单倍体资源都非常珍贵。利用单倍体人工加倍得到纯合二单倍体，将对桃遗传学研究及加速育种进程奠定坚实的基础，意义重大。

而国内目前没有桃单倍体诱导加倍的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种离体诱导桃单倍体染色体加倍的方法。

本发明所要求保护一种离体诱导桃单倍体染色体加倍的方法，可为浸泡法或者培养基法。

所述浸泡法可包括如下步骤：将桃单倍体组培苗茎段置于浓度为1000-5000mg/L的秋水仙素溶液中浸泡处理1-4天。

进一步地，所述浸泡法可包括如下步骤：将桃单倍体组培苗茎段置于浓度为2000mg/L的秋水仙素溶液中浸泡处理2-4天。

更进一步地，所述浸泡法可包括如下步骤：将桃单倍体组培苗茎段置于浓度为2000mg/L的秋水仙素溶液中浸泡处理4天。

所述方法中，将桃单倍体组培苗茎段置于秋水仙素溶液中进行浸泡处理的过程中还可以加以震荡处理(如120rpm摇床震荡)。

在将桃单倍体组培苗茎段置于秋水仙素溶液中进行浸泡处理后，还可包括如下步骤：将所述桃单倍体组培苗茎段接种到改良F₁₄培养基中培养，待叶芽生长出无菌苗时(如苗长高至3-4cm时)，进行倍性鉴定(如取叶片使用流式细胞仪进行倍性鉴定)。

所述培养基法可包括如下步骤：将桃单倍体组培苗茎段接种在含终浓度为500-2000mg/L秋水仙素的培养基中共培养1-4周。

进一步地，所述培养基法可包括如下步骤：将桃单倍体组培苗茎段接种在含终浓度为1000mg/L秋水仙素的培养基中共培养2-3周。

在将所述桃单倍体组培苗茎段接种到含有秋水仙素的培养基中共培养后，还可包括如下步骤：将所述桃单倍体组培苗茎段转接到不含有秋水仙素的所述培养基上培养，待叶芽生长出无菌苗时(如苗长高至3-4cm时)，进行倍性鉴定(如取叶片使用流式细胞仪进行倍性鉴定)。