[发明专利]与大口黑鲈食欲抑制相关的SNPs位点及应用

权利要求书

1.一种大口黑鲈POMC基因中与易摄食配方饲料性状相关的SNPs分子标记，其特征在于，所述SNPs分子标记位于POMC基因序列的ORF区，所述POMC基因序列如SEQ ID NO:1所示；

所述大口黑鲈POMC基因的cDNA全长1828bp，包括96bp的5'非翻译区，1,075bp的3'UTR和657bp的ORF，由三个外显子组成；所述SNPs分子标记为4个，分别位于POMC基因完整ORF第220bp、第327bp、第452bp和第504bp处，其核苷酸多态性分别为TC、GA、CT和TC；

所述SNPs分子标记紧密连锁构成三种POMC基因型，所述POMC基因型为：纯合子220TT/327GG/452CC/504TT、220CC/327AA/452TT/504CC，和杂合子220CT/327AG/452CT/504CT，其中220TT/327GG/452CC/504TT为大口黑鲈群体中适合以配方饲料养殖的优势基因型。

2.检测权利要求1所述SNPs分子标记的引物对在制备用于大口黑鲈易摄食配方饲料群体选育试剂盒中的用途；

所述引物对为引物对1或引物对2；

所述引物对1为：

ACTH-F1：ATGTGTCCTGTGTGGCTATTGG，

ACTH-R1：GCAGCGATTTTGTTTCTCAT；

所述引物对2为：

ACTH-F2：GCTCTGTCACTCTGACCTCA，

ACTH-R2：CCTCCCTCACTCACTTCTGC。

3.一种用于POMC基因的基因分型的HRM检测方法，其特征在于，所述HRM检测方法的步骤如下：

使用TIANamp海洋动物DNA试剂盒从10–20mg的鱼鳍组织中提取总DNA；

分别使用1.5％琼脂糖凝胶电泳和多功能酶标仪确定DNA的质量和浓度；

根据HRM分析试剂盒的实验流程，一个20μl反应的PCR混合物包括10μL 2×HRMAnalysis PreMix，6.8μL RNase-Free ddH₂O，0.6μL 10μM正向引物，0.6μL 10μM反向引物和2μL DNA模板；

两步PCR反应条件为：在95℃下预变性两分钟；95℃变性10秒，57℃下退火并延伸30秒，40个循环；

连续荧光检测可将斜率增量提高到0.05℃/s；

将温度漂移应用于所有数据，并将所有熔解曲线归一化为特定的强度阈值；

并使用CFX96 Real-Time PCR仪和软件在65-95℃的范围内产生熔解曲线并进行分析；

所述正向引物为：

Pgene-F3：GAGCATTTCCGCTGGGGG；

所述反向引物为：

Pgene-R3：CGTCGTTAGAGCTGTAGACTT。

4.权利要求1所述的SNPs分子标记在作为大口黑鲈易摄食配合饲料育种候选遗传标记中的应用，其特征在于，选育基因型为220TT/327GG/452CC/504TT的大口黑鲈群体。