[发明专利]一种荧光NP-Au靶向造影剂及其制备方法和应用

说明书

本发明属生物医用材料和造影剂制备的技术领域，涉及一种荧光NP‑Au靶向造影剂及其制备方法和应用。一种荧光NP‑Au靶向造影剂，该靶向造影剂以TAMs标志物CD163/MMR/Arg‑1为靶点，所述荧光NP‑Au靶向造影剂在制备肿瘤靶向造影剂中的应用。本发明采用多孔纳米新材料荧光NP‑Au，利用分子生物学等技术深入研究荧光NP‑Au靶向造影剂在组织细胞中的成像能力，该造影剂能够对肿瘤中的TAMs进行靶向显影。

技术领域

本发明属生物医用材料和造影剂制备的技术领域，涉及一种荧光NP-Au靶向造影剂及其制备方法和应用。

背景技术

在肿瘤发生机制的研究中，其发生发展不但是由于肿瘤细胞自身的恶变，同时与肿瘤微环境关系密切。肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages，TAMs)是肿瘤微环境中最丰富的免疫细胞，是免疫抑制细胞中重要的一员。TAMs通过创造促变异的炎性环境，分泌免疫抑制因子、细胞因子和生长因子，抑制T细胞的增殖和活化，调节并促进Th2型免疫应答，促进肿瘤细胞侵袭、参与肿瘤血管新生和促进肿瘤的浸润和转移。研究表明，TAMs存在于肿瘤发展的所有阶段，其数量与肿瘤的恶性程度和不良预后相关，在肿瘤的侵袭和转移过程中起到了促进作用，而靶向抑制TAMs可减少肿瘤生长、增殖和转移。在结肠癌小鼠模型中，使用CSF-1R抗体靶向调控TAMs极化导致小鼠肿瘤体积显著减少和长期生存，表明TAMs可以作为肿瘤治疗研究中强有力的靶标。

发明内容

鉴于现有技术存在的问题，本发明目的在于提供一种荧光NP-Au靶向造影剂及其制备方法和应用，本发明采用多孔纳米新材料荧光NP-Au，利用分子生物学等技术深入研究荧光NP-Au靶向造影剂在组织细胞中的成像能力，该造影剂能够对肿瘤中的TAMs进行靶向显影。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种荧光NP-Au靶向造影剂，该靶向造影剂以TAMs标志物CD163/MMR/Arg-1为靶点。

进一步地，所述荧光NP-Au靶向造影剂的制备方法，具体包括以下步骤。

步骤1、将1M HEPES用dd水稀释为20mmol缓冲液，分别取5μl、6μl、7μl、8μl、9μlCD163抗体溶于20mmolHEPES缓冲液中，得到50μl混合液。

步骤2、将不同浓度的CD163抗体溶液分别与1ml金纳米棒溶液作用，30分钟后测量各溶液的吸光度；当金纳米棒溶液最大吸收峰值不变时，进入吸收峰平台的初始浓度即为所需最佳CD163抗体浓度。

步骤3、取该浓度混合物溶液1ml加入50μl聚乙二醇作用10分钟后，在4℃下以15000rmb的转速离心15分钟，得到mAb-CD163/Au共轭物；然后弃去上清液，加入PBS缓冲液，得到分散良好稳定的溶液，4℃下保存。

进一步地，所述荧光NP-Au靶向造影剂在制备肿瘤靶向造影剂中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下。

本发明提供的荧光NP-Au靶向造影剂，采用荧光NP-Au利用分子生物学等技术，深入研究靶向性NP-Au在组织细胞中的成像能力。向微环境中非肿瘤细胞的优势是荧光NP-Au靶向造影剂的基因更稳定，更不容易形成耐药。从肿瘤微环境相关的巨噬细胞着手，研究TAMs在肿瘤中的靶向显像。实验证明mAb-CD163/Au在M2型巨噬细胞内的聚集明显多于M1型巨噬细胞，说明M2型巨噬细胞表面高表达CD163分子，因此可以吞噬更多的mAb-CD163/Au；随着纳米颗粒浓度的增加，存活细胞越少。当浓度相同时，mAb-CD163/Au+NIR组细胞被杀伤的情况最明显；通过靶向杀伤瘤周组织内CD163(+)巨噬细胞，可以抑制肿瘤的生长。

附图说明

图1是金纳米棒溶液的流式图像。