[发明专利]一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法

权利要求书

1.一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）样品稀释：取复合微生态产品，加入无菌生理盐水后置于室温下振荡混匀，制成菌悬液；取菌悬液用无菌生理盐水依次进行10倍梯度稀释；

2）高温处理：分别取三个稀释度的菌液进行高温处理，去除乳酸菌类、酵母菌类、曲霉菌类的干扰，之后迅速冷却至室温备用；

3）培养及计数：取经步骤2）处理后的菌液0.50 mL接种在梭菌增殖培养基试管中，接种于液体石蜡面以下，不吹打，每支试管需更换接种枪头；将接种后的试管垂直放于试管架上，使接种后的试管冷却至室温；将试管置入30℃恒温培养箱中，培养12-15h后对丁酸梭菌芽孢计数。

2.如权利要求1所述的一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法，其特征在于：步骤3）中，所述梭菌增殖培养基试管是在每根试管中分装15 mL梭菌增殖培养基，之后覆2cm液体石蜡，用硅胶塞塞住试管口，并于115℃灭菌20 min后得到。

3.如权利要求2所述的一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法，其特征在于：所述梭菌增殖培养基的制备方法为：将酵母浸粉3.0 g、牛肉浸粉10.0 g、胰蛋白胨10.0 g、葡萄糖5.0 g、可溶性淀粉1.0 g、氯化钠5.0 g、三水合乙酸钠3.0 g、半胱氨酸盐酸盐0.5g、琼脂粉7.0 g加入到水中，加热煮沸10 min，然后补足水至1000 mL，调pH至7.0±0.1。

4.如权利要求2所述的一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法，其特征在于：所述液体石蜡是将固体石蜡加热熔化成液体，然后放置在50℃恒温水浴锅中备用得到。

5.如权利要求1所述的一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法，其特征在于：步骤3）中，观察长出的单菌落，选取观察到的菌落数在30-100个之间的试管，且同一梯度平行测定值相对偏差不超过10.0 %，对丁酸梭菌芽孢计数。

6.如权利要求1所述的一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法，其特征在于：步骤2）中高温处理是在80℃水浴处理10min。

7.如权利要求1所述的一种复合微生态产品中丁酸梭菌芽孢的计数方法，其特征在于：步骤1）中，所述无菌生理盐水是将8.5g氯化钠溶于1L水中，并于121℃灭菌30min后得到。