[发明专利]一种银杏叶提取物中黄酮类化学成分的分离方法

权利要求书

1.一种银杏叶提取物中黄酮类化学成分的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：

S1、将银杏叶提取物经过硅胶柱吸附，依次用5:1、3:1、2:1（v/v）的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集2:1（v/v）石油醚-乙酸乙酯洗脱流份，标记为A1；

S2、将所述A1用硅胶柱吸附，依次用5:1、10:1、5:2（v/v）的乙酸乙酯-甲醇进行梯度洗脱，收集各洗脱液的流份，分别标记为B1、B2和B3；

S3、将所述B1用SephadexLH-20柱吸附，依次用7:3、9:1（v/v）的甲醇-水进行洗脱，收集各洗脱液的流份，分别标记为C1和C2；

S4、将所述C1用制备型HPLC色谱柱分离，流动相为60:40（v/v）的甲醇-0.05%磷酸，在出峰时间段10-15min收集、干燥后得落叶松脂醇-4,4脂醇二葡萄糖苷，在出峰时间段16-21min收集、干燥后得Urolignoside；

S5、将所述C2用制备型HPLC色谱柱分离，流动相为97:3（v/v）的甲醇-0.1%三氟乙酸水，在出峰时间段8-10min收集、干燥后制备得Biginkgoside A；

S6、将所述A1用制备型HPLC色谱柱分离，流动相为8:1（v/v）乙酸乙酯-甲醇，在出峰时间段4-5min收集、干燥后得槲皮素-3-O-α-L鼠李糖-2”-（6”-p-香豆酰基）-β-D）葡萄糖苷，在出峰时间段10-12min收集、干燥后得山柰酚-3-O-α-L鼠李糖-2”-（6”-p-香豆酰基）-β-D）葡萄糖苷；

S7、将所述B3用中压反相硅胶柱吸附，依次用9:1、8:1、3:1（v/v）的甲醇-水洗脱，收集各洗脱液的流份，分别标记为D1、D2和D3；

S8、将所述D1经制备型HPLC色谱柱分离，流动相为15:85（v/v）乙腈-水，在出峰时间段3-5min、5-6min、8-10min、15-20min、22-25min分别收集、干燥后制备得到槲皮素-3-O-（2”,6”-α-L-二鼠李糖）-β-D葡萄糖苷、杨梅酮3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-（2”,6”-α-L-二鼠李糖）-β-D葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-（2”,6”-α-L-二鼠李糖）-β-D葡萄糖苷和槲皮素-3-O-[2’-O-（6”-O-对香豆酰基）-D-葡萄糖基]-α-L鼠李糖]-7-O-β-D葡萄糖苷；

S9、将所述D2经制备型HPLC色谱柱分离，流动相为80:20（v/v）甲醇-水，在出峰时间段6-10min、13-17min、25-27min分别收集、干燥后制备得到4’-甲基-杨梅素-3-O-芸香糖苷、3’-甲基-杨梅素-3-O-芸香糖苷、槲皮素3-O-（2”-β-D-葡萄糖）-α-L）鼠李糖苷；

S10、将所述D3经制备型HPLC色谱柱分离，流动相为90:10（v/v）乙腈-水，在出峰时间段10-12min收集、干燥后制备得到山柰酚3-O-（2”-β-D葡萄糖）-α-L）鼠李糖苷。

2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物中黄酮类化学成分的分离方法，其特征在于，所述银杏叶提取物中总黄酮苷的含量≥24%；和/或

所述银杏叶提取物的制备方法为：将银杏叶粉碎，用49.5~50.5（v/v）%乙醇加热回流提取，合并提取液，浓缩后用大孔吸附树脂柱吸附，依次用水和15~85（v/v）%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，即得。

3.一种银杏叶提取物中黄酮类化学成分的分离方法，其特征在于，所述化学成分为槲皮素-3-O-α-L鼠李糖-2”-（6”-p-香豆酰基）-β-D）葡萄糖苷和山柰酚-3- O-α-L鼠李糖-2”-（6”-p-香豆酰基）-β-D）葡萄糖苷；所述分离方法包括以下步骤：

将银杏叶提取物经过硅胶柱吸附，依次用5:1、3:1和2:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，收集2:1（v/v）石油醚-乙酸乙酯洗脱流份，标记为A1；

将所述A1用制备型HPLC色谱柱分离，流动相为8:1（v/v）乙酸乙酯-甲醇，制备得到所述槲皮素-3-O-α-L鼠李糖-2”-（6”-p-香豆酰基）-β-D）葡萄糖苷和山柰酚-3- O-α-L鼠李糖-2”-（6”-p-香豆酰基）-β-D）葡萄糖苷。