[发明专利]一种新冠IgG/IgM抗体检测试纸条的制备方法

说明书

本发明涉及涉生物分析及医疗领域，公开了一种新冠IgG/IgM抗体检测试纸条的制备方法。以一定比例混合重组新冠病毒N蛋白和鸡IgY作为抗原标记的纳米金制备结合垫，以抗体包被液稀释的鼠抗人IgM和和鼠抗人IgG，兔抗鸡IgY作为分别作为T线和C线。通过依次组装样品垫、结合垫、NC膜和吸水纸制备成试纸条。本发明提供的方法制备方法，可以为制备新冠病毒抗体胶体金检测试纸条提供，样品垫的处理方法、结合垫的预处理及制备方法；抗体包被硝酸纤维膜的制备方法，对生物分析及医疗领域具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种新冠IgG/IgM抗体检测试纸条的制备方法，设计可用于生物分析及医疗领域。

背景技术

由于核酸检测试剂盒对检测环境、检测人员的高要求，以及核酸检测专门实验室的普及程度，极大的限制了核酸检测试剂盒的基层以及家庭大范围筛查、推广和应用。目前，除了核酸检测方法，通过检测病毒本身的蛋白（抗原）或者病毒感染后体内产生的抗体来实现快速筛查也是可行的。本发明针对2019-nCoV N蛋白特异性抗体，结合胶体金免疫层析技术，开发出可捕获新型冠状病毒感染人群血清特异抗体（IgM-急性感染/IgG-既往感染）的胶体金层析检测检测试纸条，打破需要专业的仪器和特殊检测环境的缺点。

发明内容

本发明的目的是针对针对2019-nCoV N蛋白特异性抗体，提供一种检测特异性抗体的胶体金免疫层析试纸条制备方法；

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

所述样品垫处理方法为，浸入处理缓冲液：5-20 mM PB 0.1-2%蔗糖+-0.01-0.5%吐温-20+0.001-0.5mg/mL 抗RBC抗体 pH=6.5-9.5。浸入1-3 min后取出，在25-45 ^oC下干燥3-48小时；

所述金标垫处理方法为，浸入处理缓冲液：5-20 mM PB 0.1-5%蔗糖+-0.01-0.5%吐温-20+0.001-3% BSA pH=6.5-9.5。浸入1-3分钟后，在25-45 ^oC下干燥3-48小时；

所述硝酸纤维素膜需包被相应抗体，T1抗体为鼠抗人IgM，T2鼠抗人IgG,质控线为兔抗鸡IgY。以1 μL/cm速率划线后，在 25-45 oC下干燥3-48小时；

所述抗原修饰的抗体金为N蛋白标记纳米金和鸡IgY标记纳米金混合液，混合比例为1:1-8:1。

具体实施方式：

以下通过具体的实施例对本发明作进一步说明，有助于本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明；

实施例1：

N蛋白标记纳米金的制备：

1)取1 ml 30nm胶体金溶液于洁净容器中，加入适量体积0.5M K2CO3溶液，边加入边混匀，全部加入后混匀1min；以pH试纸鉴定pH值，胶体金溶液pH值10左右；

2)取 N蛋白溶液加入到上述胶体金溶液中，边加入边混匀，使得最终N蛋白浓度为5 μg/mL；加入完毕后混匀反应30min；

3)取BSA封闭液，边震荡边加入至上述胶体金溶液中，使得BSA浓度为1%，震荡反应30min；

4)将上述胶体金溶液进行离心弃上清，转速8000-9000g/min，离心10min，以pH=10的PB溶液洗涤3次。（注意洗涤液pH值不可过低，负责纳米金会团聚，无法重悬）；

5)取0.1 ml 胶体金重悬液（10mM PB+3%蔗糖+ 1%BSA+0.1%的吐温20，pH=8.5），充分溶解上述胶体金沉淀；

实施例2：

样本垫制备：在洁净间中用量筒量取样品垫处理液（20mM PB+2%蔗糖+0.1%吐温-20+0.03mg/mL 抗RBC抗体 pH=8.5），40 mL准备样品垫1张（规格21cm×30cm）；