[发明专利]用于分离获得肺脏干细胞的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了用于分离获得肺脏干细胞的试剂盒及方法，其中肺脏干细胞分离试剂盒包含：组织消化液；经过辐照处理的胚胎成纤维细胞；以及肺脏干细胞分离培养液。利用该试剂盒能够有效获得可以大量扩增的肺脏干细胞，且获得的肺脏干细胞活性好、纯度高、无细菌和支原体污染。

母案信息

本发明的母案申请号：201610216939.0，申请日：2016年4月8月，发明名称：用于分离获得肺脏干细胞的试剂盒及方法。

技术领域

本发明涉及肺脏干细胞分离和移植技术领域，具体涉及用于分离获得肺脏干细胞的试剂盒及方法。

背景技术

随着空气污染的增加及病毒感染等其他一些因素，肺部的一些疾病如肺纤维化，慢性阻塞性肺病等越来越多的影响了人类的健康，甚至生存。对于这些疾病的治疗，目前最有效的治疗方法是肺脏移植。但是由于可用的供体有限，异体之间的免疫排斥等现实原因，能够接受肺脏移植治疗的病人数量非常稀少。除去肺脏移植，目前还没有有效的治疗手段。

肺脏干细胞属于成体干细胞，在机体内分布广泛，其在细胞移植治疗中具有器官的靶向性，再生能力强，无成瘤性，可用于自体干细胞移植治疗，免疫排斥的风险小，具有很强的可操作性。并且，目前已有研究发现，将远端气管中的肺脏干细胞分离出来，然后在体外大量扩增后移植到免疫缺陷的肺部损伤的小鼠中，移植的肺脏干细胞能够整合到小鼠肺脏中并在损伤部位形成肺泡样的结构。因而，干细胞移植在治疗肺部损伤疾病方面具有非常广阔的前景。但是，长期以来由于技术的限制，很难从成体的组织和器官中分离获得可以大量扩增的肺脏干细胞。

因而，目前的肺脏干细胞分离获得方法仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效从成体的组织和器官中分离获得可以大量扩增的肺脏干细胞的手段。

在本发明的第一方面，本发明提供了一种肺脏干细胞分离试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包含：组织消化液；经过辐照处理的胚胎成纤维细胞；以及肺脏干细胞分离培养液，

其中，所述组织消化液包含：

99体积％的PBS；

0.1-2U/ml DNA酶；

0.1-0.2mg/ml I型胶原酶；

0.1-0.2mg/ml IV型胶原酶；

0.04-0.1mg/ml分散酶；

0.1-0.5mg/ml蛋白酶XIV；

0.1-3mg/ml链丝菌蛋白酶E；以及

0.2-0.5mg/ml胰酶，

所述肺脏干细胞分离培养液包含：

90体积％的RPMI1640培养基；

10体积％的胎牛血清；

1-3mmol/LL-谷氨酰胺；

0.05-0.15mmol/Lβ-巯基乙醇；

100-1000U/ml白血病抑制因子；以及

2-5ng/ml EGF生长因子。