[发明专利]提高动物机体免疫功能的生物制剂及制备方法

权利要求书

1.提高动物机体免疫功能的生物制剂的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)对丁酸梭菌菌种进行活化处理；

(2)将经过活化处理的丁酸梭菌菌种转接到装有种子培养基的发酵罐中并在32～34℃下培养18～20h得到一级种子液，所述一级种子液中所述丁酸梭菌菌种占8vt％，随后将所述一级种子液转接至装有发酵培养基的种子罐中并在32～34℃下培养18～20h得到二级种子液，所述二级种子液中所述一级种子液占8vt％；

(3)将所述二级种子液按照8％的接种量转接装有发酵培养基的发酵罐中得到培养液，将所述培养液在32～34℃以及0.05～0.06MPa下培养18～20h，培养过程中通过添加pH调节剂将所述培养液的pH值控制在6.0至6.5，间歇式搅拌，当镜检芽孢形成率10％以上，得到发酵液；

(4)发酵液浓缩，利用碟片式离心机将发酵液5倍浓缩，得到发酵浓缩液；

(5)冷冻干燥，在发酵浓缩液中添加载体保护剂并进行冷冻干燥，所述载体保护剂的添加量为20g/L，分五个阶段进行冷冻干燥处理，第一阶段在零下40℃的条件下冷冻4h，第二阶段在零下10～40℃的条件下冷冻10h，第三阶段在零度～零下10℃的条件下冷冻8h，第四阶段在零度～零上30℃的条件下干燥16h，第五阶段在零上30～零上32℃的条件下干燥3h，得到丁酸梭菌生物制剂；

其中，所述种子培养基包括10g/L～15g/L的葡萄糖、8g/L～10g/L的蛋白胨、3g/L～5g/L的牛肉膏、12g/L～15g/L的琼脂、1g/L～3g/L的酵母粉、0.4g/L～0.6g/L的磷酸二氢钾和0.2g/L～0.3g/L的碳酸钙，所述种子培养基的pH值为7.1到7.2；

所述发酵培养基包括20g/L～25g/L的玉米淀粉、3g/L～6g/L的酵母膏、1g/L～3g/L的蛋白胨、1g/L～2g/L的牛肉膏、0.2g/L～0.5g/L的磷酸二氢钾、0.5g/L～1g/L的碳酸氢钠、0.1g/L～0.2g/L的硫酸锰和0.05g/L～0.1g/L的氯化钙，所述发酵培养基的pH值为7.1到7.2。

2.根据权利要求1所述的提高动物机体免疫功能的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述(5)步骤中载体保护剂包括3g/L～5g/L的海藻糖、6g/L～8g/L的大豆蛋白粉和4g/L～8g/L的脱脂奶粉。

3.根据权利要求1所述的提高动物机体免疫功能的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述(3)步骤中pH调节剂为10wt％氢氧化钾溶液。

4.根据权利要求1所述的提高动物机体免疫功能的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基按比例配好后在121℃灭菌30min，灭菌结束后，降温并同时通入氮气保压，控制发酵罐中的罐压为0.05～0.06MPa，当温度降低到培养温度时将经加热活化后的二级种子液接入。

5.根据权利要求1所述的提高动物机体免疫功能的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述(5)步骤中丁酸梭菌生物制剂的含水率≤5％。

6.根据权利要求1所述的提高动物机体免疫功能的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述(3)步骤中的间歇式搅拌的具体步骤为：每2h搅拌1～2min，控制搅拌速度为75r/min～100r/min。

7.提高动物机体免疫功能的生物制剂，其特征在于，该丁酸梭菌生物制剂通过权利要求1-6中任意一项所述的制备方法制成。