[发明专利]一种人源CYP2D6*10转基因小鼠模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种人源CYP2D6*10转基因小鼠的构建方法。本发明利用同源重组原理，采用ES打靶的方式，在Cyp2d22基因exon4‑5位点定点敲入hCYP2D6*10的表达框，再用Crispr/Cas9的方式敲除Cyp2d基因簇。先制备得到打靶载体，将该载体线性化后，电转染ES细胞。经长片段PCR鉴定，获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞克隆经扩增后，注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中，获得嵌合鼠。本发明繁育出的人源CYP2D6*10转基因小鼠与非转基因小鼠相比，能表达人的CYP2D6*10型基因(中国人群优势占比等位基因)，可替代人用于开展底物药物的药代动力学和药效学相关研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种CYP2D6*10转基因小鼠模型的构建方法，特别涉及将中国人群CYP2D6家族中主要基因型CYP2D6*10表达在转基因小鼠的方法。

背景技术

CYP2D6是CYP450家族中遗传多态性最显著的亚型之一，介导了至少20％临床用药的体内消除(Gaedigk A,Sangkuhl K,Whirl-Carrillo M,Klein T,Leeder JS.Predictionof CYP2D6 phenotype from genotype across world populations.Genet Med.2017；19(1):69-76；Zhou SF,Liu JP,Lai XS.Substrate specificity,inhibitors andregulation of human cytochrome P450 2D6 and implications in drugdevelopment.Curr Med Chem.2009；16(21):2661-805.)。目前已报道141个CYP2D6等位基因(不包含非氨基酸编码区变异)，其编码的蛋白功能发生广泛的酶活性改变，表现为活性丧失、降低、正常或增加。代谢表型在不同个体、种群间的分布存在显著差别，从等位基因的发生频率来看，CYP2D6*1在东亚地区并不占多数，而CYP2D6*10等位基因的频率却高达～50％(Qian JC,Xu XM,Hu GX,Dai DP,Xu RA,Hu LM,et al.Genetic variations of humanCYP2D6 in the Chinese Han population.Pharmacogenomics.2013；14(14):1731-43；DaiDP,Geng PW,Wang SH,Cai J,Hu LM,Nie JJ,et al.In vitro functional assessment of22newly identified CYP2D6 allelic variants in the Chinese population.BasicClin Pharmacol Toxicol.2015；117(1):39-43)。CYP2D6*10是中国人群弱代谢的主要原因，对其底物药物代谢动力学变化的研究是掌握药物个体间疗效差异的重要途径。