[发明专利]一种植物开放组培方法及专用培养基

说明书

本发明属植物生物技术领域，具体涉及在植物开放组培中进行培养瓶敞口培养的方法及专用培养基。在配制开放式组织培养基时，培养基各组分分装到培养瓶后，投入氧气缓释颗粒，平放冷却凝固，培养基接种芽苗外植体后，在培养基表面灌注一层非挥发性油性液体，敞口培养。本发明加强瓶苗光合作用，得到健壮瓶苗，降低蒸腾作用，提高瓶苗移栽成活率，本发明还可减少培养基抗菌剂使用量，抑制培养基过度酸化。本发明成本低，制备简单，应用方便，效果显著。

技术领域

本发明属植物生物技术领域。涉及一种植物开放组培方法及专用培养基，具体涉及在植物开放组培中瓶口敞开培养以改善瓶苗气体微环境的方法。

背景技术

植物组织培养技术种苗生产、脱除病毒、种质改良等具有广阔的市场前景。近年引起广泛关注的植物开放式组织培养（开放组培），是在培养基添加抗菌剂，不需高压灭菌，在开放环境(不需超净台)接种, 加盖常规培养。开放组培在提高操作效率、降低组培成本意义重大，相关论文（刘福平.植物抗菌组培中抗菌剂应用的研究方法. 基因组学与应用生物学，2014， 33（4）：910-915，前言）和专利申请日益增多，如申请号200810047258.1、200910060484.8、200910088122.X、201010257107.6、201110195928.6、201110410305.6、201110134608.X、201110311185.4、201310238845.X、201310204499.3、201410097129.9、201510151118.9、201510933918.6、201610696644.8、201710207906.4、201911177574.5、202010698173.0等。

传统组培“组培苗是在密闭的试管或玻璃瓶中培养，由于容器内湿度过高、CO₂亏缺，致使培养出的小植株体不能正常地进行光合作用，而不得不依靠培养基中的糖进行异养生长，造成培养时间过长，小植株体生长缓慢，植株长势瘦弱，移栽成活率低；培养基中的糖还会促进微生物的繁殖，加大植株的污染率；容器内的环境异常，如有害气体增加，温度较高，湿度较大，会造成植株叶片少、徒长、玻璃化，难于移栽，或植株发育迟缓，驯化阶段植株死亡率高等”[马明建，宋越冬.基于环境控制的组培苗无糖培养系统.农业工程学报，2009,25（6）:192-197]。开放组培苗也是在密闭容器中培养，所得瓶苗同样存在上述缺陷。

“常规培养条件下的试管苗气孔密度比较大, 功能不完善, 在移栽驯化过程中很难适应外界环境, 使光合能力降低, 而且容易出现过度失水等问题, 直接影响试管苗的移栽成活率。……移栽初期试管苗的气孔开度最大, 蒸腾速率达到峰值, 试管苗处于失水最快的状态。”（孙冬青等.组培微环境对葡萄风信子组培苗生长及移栽后生理特性的影响.西北农业学报，2008, 17(4) : 244-248, 262）。

开放组培中，培养基微生物污染来自培养基自身所夹杂的微生物和瓶内空间微生物沉降到培养基，开放组培的抗菌剂溶解在琼脂培养基内，只对培养基部分抗菌，并不针对瓶内空间的微生物，以致培养基所附加抗菌剂必须保持在较高的浓度，难免对所培养植物材料产生毒副作用，这对矛盾是开放式组培的技术难点(关键)，限制了开放式组培的广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种植物开放培养方法及专用培养基，接种外植体后，瓶口敞开培养以改善瓶苗气体微环境的方法。

本发明的技术方案如下：

一种植物开放培养方法，在配制开放组培培养基时，培养基各组分、琼脂、抗菌剂和水加热完全融化后，调酸碱度，分装到培养瓶，在培养瓶内投入氧气缓释颗粒，不加瓶盖，用干净薄膜或面板覆盖瓶口，平放冷却凝固。按常规开放组培方法接种芽苗外植体，在培养基表面灌注一层非挥发性油性液体，厚0.2-0.5cm，培养瓶不加瓶盖,敞口平放培养。