[发明专利]一种植物离体开放培养方法及离体开放专用培养基

说明书

本发明公开了一种植物离体开放培养方法及离体开放专用培养基，所述的方法，配制植物离体培养基和接种芽苗之后，将氧气缓释颗粒投放瓶内，摁压埋入培养基，随后在培养基表面灌注一层非挥发性油性液体，厚0.2‑0.5cm，培养瓶不加瓶盖,敞口培养；所述的氧气缓释颗粒材料包括吸水缓释材料和释氧剂过氧化钙粉，吸水缓释材料粉与过氧化钙粉无菌条件混合造粒，粒径0.3‑0.8cm。发明有效缓解了容器内湿度过高、CO₂亏缺，瓶内有害气体积累的问题，降低瓶苗蒸腾强度，有利瓶苗正常生长和提高移栽成活率。

技术领域

本发明属植物生物技术领域，涉及一种植物离体开放培养方法及离体开放专用培养基。具体涉及一种植物离体培养期间开放瓶口以改善瓶苗气体微环境的方法。

背景技术

植物组织（离体）培养技术种苗生产、脱除病毒、种质改良等具有广阔的市场前景。“在传统的植物组织培养中，组培苗是在密闭的试管或玻璃瓶中培养，由于容器内湿度过高、CO₂亏缺，致使培养出的小植株体不能正常地进行光合作用，而不得不依靠培养基中的糖进行异养生长，造成培养时间过长，小植株体生长缓慢，植株长势瘦弱，移栽成活率低；培养基中的糖还会促进微生物的繁殖，加大植株的污染率”[马明建，等.基于环境控制的组培苗无糖培养系统.农业工程学报，2009,25（6）:192-197]。具体阐述如下：

1.植物组织培养中每天进行光照和黑暗交替培养，尽管目前培养基中的碳源蔗糖含量一般为高达3%，“在暗期由于呼吸作用瓶内高浓度CO₂，在开始光照的1～2 h 内CO₂浓度即由几千μl•L-1迅速下降到70～90μl•L-1 , 随后的光照期中都维持这种低浓度状态”[郭海,等. CO₂气体在植物组培中的应用及前景. 核农学报，2004,18(5):368～371]，它接近植物光合作用的平均CO₂补偿点50μl• L-1 ，比大气CO₂浓度350μl•L-1低得多，光合作用效率十分低下。

2.“培养器内相对湿度近于100%,以致造成小植株的表皮角质层不够发达, 驯化期间的水势低, 从而导致驯化阶段苗成活率降低。”[史跃林.组培苗的生育环境与调节.植物生理学通讯,1990(3): 65-67]。培养瓶内空气水汽来自叶片蒸腾作用，也来自琼脂水分向瓶内空间的蒸发作用。

3.“培养基中生长素、细胞分裂素、吲哚乙酸、BA及KIN含量的增加可促进乙烯产生, 对器官分化、繁育起抑制作用。而CO₂可抑制乙烯的产生,延缓植株的衰老, 促进植株的生长、发育。”[郭海,等. 同上]。在密闭瓶内有害气体不易散发，对瓶苗生长产生毒害。

4.“常规培养条件下的试管苗气孔密度比较大, 功能不完善, 在移栽驯化过程中很难适应外界环境, 使光合能力降低, 而且容易出现过度失水等问题, 直接影响试管苗的移栽成活率。……移栽初期试管苗的气孔开度最大, 蒸腾速率达到峰值, 试管苗处于失水最快的状态。”（孙冬青等.组培微环境对葡萄风信子组培苗生长及移栽后生理特性的影响. 西北农业学报，2008, 17(4) : 244-248, 262）。

发明内容

本发明的目的在于提供一种植物离体开放培养方法，常规接种后，培养瓶不加瓶盖，瓶内外空气流动，有效缓解瓶内湿度过高、CO₂亏缺、有害气体积累的问题。

本发明的技术方案如下：

一种植物离体开放培养方法，配制植物离体固体培养基和接种芽苗之后，将氧气缓释颗粒投放培养瓶（或其它离体培养容器）内，压入培养基，随后在培养基表面灌注一层经高压灭菌的非挥发性油性液体，厚0.2-0.5cm，培养瓶不加瓶盖,平放敞口培养；