[发明专利]一种仿野生岩缝附生栽培铁皮石斛的甄别方法

权利要求书

1.一种仿野生岩缝附生栽培铁皮石斛的甄别方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：选材

于4月初铁皮石斛开花前的生长时期，分别采集相似气候地区仿野生岩缝栽培、活树附生栽培和大棚栽培三种不同种植生境的铁皮石斛新鲜茎条，总数量不少于40份，样品种源均来自本地驯化种源，均采集2年生茎条，样品分别摆放；

步骤二：清洗

将采集的铁皮石斛茎条样品在室内除去叶片，以自来水、蒸馏水、去离子水分别各冲洗2次，在常温条件下沥水，表面风干；

步骤三：测量

将铁皮石斛茎条样本整齐平铺摆放，使用数码相机分别批量拍摄照片，并在制图软件中对所有茎条照片统一比例尺，测量和标记茎条各节的节长和节宽(直径)尺寸数据，测量时从顶端向下，仅测量每根石斛茎条第1节至第6节对应的节长、节宽，采集若干组样本数据，记录；

步骤四：冻干

茎条测量完成后，将茎条分别冻干至恒重；

步骤五：外形数据处理

在茎条冻干过程中，对步骤三获取的茎条外形数据进行处理：

对铁皮石斛前6节茎条节长、节宽数据做统计分析；利用单因素方差分析比较三种不同生境的茎条节长、节宽是否存在显著差异，根据单因素方差分析的结果进行对比分析，选出有显著差异的节长、节宽数据，采用两两间多重比较检验法进一步验证差异性，采用判别分析构建典型判别函数散点图模型；

步骤六：粉碎

将步骤四冻干后的茎条进行粉碎，过筛，得到干粉后在干燥器储存待用；

步骤七：干粉主微量元素测试

(1)标准溶液制备：将多元素标准液逐级稀释成0-200ng/ml；

(2)内标溶液制备：将100mg/L标准溶液逐级稀释成20ng/ml；

(3)铁皮石斛干粉样品消解：①样品准备：称取步骤六所得铁皮石斛干粉样品0.2g，分别置于聚四氟乙烯消解管中，将消解管置于石墨消解孔中，随同样品进行空白试验；②加液：向消解管中加入6mL硝酸，摇匀，拧紧管盖；③消解：消解仪程序升温至60℃，加热回流1h，再升温至100℃，加热回流1h，冷却至室温，打开管盖，排出红棕色气体(氮氧化物)；④定容：用少量超纯水吹洗消解管内壁，再用2％硝酸定容至50mL待测；

(4)主微量元素含量测定：分别测定样品溶液内主量元素和微量元素含量，记录所得数据；

步骤八：干粉测试数据分析

对铁皮石斛茎条所制得茎部干粉所含主量元素、微量元素数据做统计分析：

(1)利用单因素方差分析比较三种不同生境对应的干粉中矿质元素是否存在显著差异，根据单因素方差分析的结果，选出有显著差异的主、微量元素，针对有显著差异的主、微量元素采用LSD两两间多重比较检验法检验；

(2)通过前期预分析，找出有显著差异特征元素，然后分别以所有矿质元素作为变量，采用逐步判别分析，甄别主、微量元素对三种不同生境铁皮石斛溯源的鉴别可靠性，获得典型判别函数散点图模型；进一步采用交互验证法(刀切法)和初始识别对判别模型的可靠性进行验证；

步骤九：生境甄别

采集同一地区仿野生岩缝栽培、活树附生栽培和大棚栽培三种不同种植生境的铁皮石斛茎条，将茎条混合，作为待测试样品；经过步骤一到步骤三的处理和数据测量，经过步骤五的数据分析，生成茎条节长、节宽典型判别函数图，与步骤五所得的典型判别函数散点图模型进行对比，即可初步甄别待测试样品的生境条件；

经过步骤四、步骤六的处理，按照步骤七检测样品干粉中主、微量元素含量，经过步骤八的数据分析，生成主、微量元素典型判别函数图，与步骤八所得的典型判别函数散点图模型进行对比，即可准确甄别待测试样品的生境条件。

2.根据权利要求1所述的一种仿野生岩缝附生栽培铁皮石斛的甄别方法，其特征在于：所述步骤一中，采集三种不同生境铁皮石斛茎条样品时，仿野生岩缝栽培样品以种植核心区为中心取样点，在东、西、南、北四个方向上间隔2m以上，每丛植株只采集1-2根茎条，每10根茎条混合均匀作为1份样品；活树附生栽培样品采集时，以中心取样点在东、西、南、北四个方向木荷树间隔2m以上，每丛植株只采集1-2个茎条，每10根茎条混合均匀作为1份样品；大棚栽培样品采集时，每根茎条采样区域间隔1m以上。