[发明专利]一种circRNA过表达成环载体DNA序列及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种circRNA过表达成环载体DNA序列，其特征在于：所述DNA序列包括如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的circRNA过表达成环载体DNA序列，其特征在于：所述DNA序列的引物包括5circ序列引物和3circ序列引物，其中，5circ序列引物核苷酸序列如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示；3circ序列引物核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

3.含有如权利要求1所述的circRNA过表达成环载体DNA序列的表达载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌。

4.含有如权利要求1所述的circRNA过表达成环载体DNA序列的表达载体，其特征在于：所述载体为慢病毒表达载体。

5.一种circRNA过表达成环载体的构建方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

S1、根据载体的序列信息，设计circRNA过表达的DNA序列，所述DNA序列包括如权利要求1所示的核苷酸序列，并利用引物设计软件设计引物；

S2、通过PCR扩增引物合成得到所述DNA序列；

S3、构建circRNA专用的表达载体：将步骤S2中合成的DNA序列通过酶切位点构建入载体中，得到表达载体。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于：所述步骤S2中circRNA基因通过NotI、EcoRI、XmaI、TspMI、SmaI、TliI、XhoI、PspXI、PaeR7I和/或XbaI酶切位点进行构建到载体中。

7.如权利要求5～6任一项所述的方法构建得到的circRNA过表达成环载体。

8.如权利要求7所述的circRNA过表达成环载体应用，其特征在于：所述应用包括用于普通真核表达、慢病毒表达、腺病毒表达、逆转录病毒表达、原核表达体系中。

9.将如权利要求7所述的circRNA过表达成环载体应用于过表达目的基因。

10.一种过表达目的基因的方法，其特征在于：包括如下步骤：用内切酶切除如权利要求7所述的circRNA过表达成环载体的填充序列，然后将所述目标基因的核苷酸序列连接至circRNA过表达成环载体中进行表达。