[发明专利]胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺

权利要求书

1.胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺，其特征在于：包括以下步骤：

S1，分离到产胶冻芽孢杆菌，筛选菌株；

S2，制作斜面及平板测定培养基：按重量，将2g～8g的蔗糖、0.5g～4g的磷酸氢二钠、0.1g～0.7g的硫酸镁、0.002g～0.007g的三氯化铁、0.05g～0.15g的碳酸钙、0.04g～0.08g的黄腐殖酸钾、14g-22g的琼脂肪和1000ml蒸馏水制作成斜面及平板测定培养基，调整pH为7.3-7.7；

S3，制作三角瓶发酵培养基：按重量，将1g～3g糖蜜、0.24g～0.7g豆粕粉、0.05g～0.15g硫酸镁、0.03g～0.08g磷酸氢二钾弹、0.05g～0.15g碳酸钙和80g～100g水制作成三角瓶发酵培养基，调整pH为7.3-7.7；

S4，将胶冻芽孢杆菌按5％的体积比接种到步骤S2制得的斜面及平板测定培养基中进行菌种活化，活化温度为28～33℃，活化时长24h，直至得到胶冻芽孢杆菌发酵液；

S5，将步骤S4中活化完成的菌种接种到步骤S3中制得的三角瓶发酵培养基中发酵培养；

S6，在步骤S5发酵结束时，向胶冻芽孢杆菌发酵液中添加1％～2％体积的壳聚糖，并静止5～8小时后，去除上部清液，即得到高密度胶冻芽孢杆菌菌液；

S7，将步骤S6中发酵培养完成的胶冻芽孢杆菌进行活菌数测定。

2.根据权利要求1所述的胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺，其特征在于：所述步骤S1还包括以下步骤：

S01，土壤菌悬液获得：将铝土矿样加入到无菌水中，振荡后静置，取上清液加入到液体无氮培养基中；

S02，富集培养：将步骤S01中由液体无氮培养基培养所得菌种于液体无氮培养基中进行转接培养，共转接4次，转接量按体积百分比计，每次培养液的10％接种于铝土矿含量逐渐增加的液体培养基中；

S03，分筛培养：将步骤S02中的最后一次转接培养的培养液稀释103-105倍后，涂布于固体无氮培养基中，置于35℃恒温培养箱中培养24h，待平板表面不再有水滴时，倒置平板，培养3-5天，随时观察细菌菌落生长情况；根据菌落长出的时间以及菌落的形态，从培养基平板上挑出黏液状凸起的透明菌落，进行再培养，直到获得纯培养；

S04，复筛：将步骤S03中得到的纯菌种接种于液体含氮培养基中，能够分解硅酸盐和铝硅酸盐组成的岩石矿物的细菌即为胶冻芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺，其特征在于：所述胶冻芽孢杆菌的鉴定方法为：用硅钼蓝法测定溶液中硅含量。

4.根据权利要求1所述的胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺，其特征在于：步骤S5中三角瓶发酵培养液的装液量采用60mk/500ml三角瓶。

5.根据权利要求1所述的胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺，其特征在于：步骤S5中的发酵培养条件为32～34℃恒温箱中培养60～70h。

6.根据权利要求1所述的胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺，其特征在于：步骤S5中的培养采用恒温摇瓶培养方式。

7.根据权利要求1所述的胶冻芽孢杆菌的高效发酵工艺，其特征在于：所述步骤S7中活菌数测定采用平板稀释法测定。