[发明专利]一种LC-MS法同时测定脑立清制剂中6种成分含量的方法

说明书

本发明公开了一种LC‑MS法同时测定脑立清制剂中6种成分含量的方法，具体为以黄芪甲苷溶液为内标溶液，β‑脱皮甾酮、25R牛膝甾酮、25S牛膝甾酮、牛黄猪去氧胆酸、甘氨酸去氧胆酸、甘氨酸鹅去氧胆酸混合溶液为标准曲线溶液，LC‑MS法检测脑立清制剂中β‑脱皮甾酮、25R牛膝甾酮、25S牛膝甾酮、牛黄猪去氧胆酸、甘氨酸去氧胆酸、甘氨酸鹅去氧胆酸的含量。本发明采用液质联用技术建立了脑立清制剂中6种成分含量的测定方法，可以对脑立清制剂中牛膝和猪胆粉的质量进行分析，建立的LC‑MS法灵敏度高、专属性强，重现性好，为完善脑立清制剂的质量控制标准提供了依据。

技术领域

本发明属于药剂分析技术领域，具体涉及一种LC-MS法同时测定脑立清制剂中6种成分含量的方法。

背景技术

脑立清丸（胶囊、片）由磁石、赭石、清半夏、薄荷脑、猪胆汁/猪胆汁粉和牛膝等十余味中药组成，具有情热平肝、降逆止痛的作用，用于肝热上升引起的头痛脑胀、眩晕耳鸣、烦躁易怒，三种剂型现行质量标准不同。现行的脑立清片剂的质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》（第十九册）中，脑立清胶囊和脑立清丸均收载于《中国药典》2010年版第一部。现行标准中定量控制指标较少，考察指标比较简单仅对单一成分表征脑立清的质量，如脑立清丸标准仅以冰片含量表征脑立清丸质量；脑立清片质量标准中只收载了定性鉴别，未收载含量测定项。现有方法难以全面反映制剂的质量状况，并且难以有效控制药品质量及用药安全性。

近年来，随着中药制剂研究的不断深入以及药物分析技术的快速发展，对中成药的质量标准制订也提出更高的要求。目前的标准中增加了牛膝的显微鉴别、磁石、赭石的理化鉴别，增加了牛膝、猪胆汁的薄层鉴别，采用气相色谱法对薄荷脑、龙脑的含量进行了测定，并有研究采用原子吸收分光光度法测定了制剂中铁的含量，高效液相色谱法（HPLC）发测定牛膝有效成分齐墩果酸的含量。但薄层色谱（TLC）鉴别猪胆粉和牛膝无法有效定量，且仅采用单一成分无法有效评价其原料药的质量。现行标准不能全面保障制剂质量，有待进一步提高制剂质控指标。β-蜕皮甾酮和牛磺猪去氧胆酸为《中国药典》2015年版一部相应药材中有明确含量限度的成分，故选择β-蜕皮甾酮和牛磺猪去氧胆酸2个指标作为判定指标对脑立清制剂的质量状况进行分析，但该方法仅能够对单一成分进行限定，无法综合评价脑立清制剂中猪胆粉和牛膝的质量。

因此，为保证脑立清制剂产品质量的稳定和有效性，有必要研发一种对投料的牛膝和猪胆酸中的各成分的测定方法。

发明内容

针对现有方法难以有效反映制剂的质量状况和用药安全性，本发明提供了一种LC-MS法同时测定脑立清制剂中6种成分含量的方法，该测试方法简单，能够实现对牛膝和猪胆粉（汁）中多种有效成分的同时检测。

本发明通过以下技术方案实现：

一种LC-MS法同时测定脑立清制剂中6种成分含量的方法，以黄芪甲苷溶液为内标溶液，β-脱皮甾酮、25R牛膝甾酮、25S牛膝甾酮、牛黄猪去氧胆酸、甘氨酸去氧胆酸、甘氨酸鹅去氧胆酸混合溶液为标准曲线溶液，LC-MS法检测脑立清制剂中β-脱皮甾酮、25R牛膝甾酮、25S牛膝甾酮、牛黄猪去氧胆酸、甘氨酸去氧胆酸、甘氨酸鹅去氧胆酸的含量。

进一步地，所述的LC-MS法同时测定脑立清制剂中6种成分含量的方法具体包括以下步骤：

（1）内标溶液的制备：称取黄芪甲苷，加入甲醇配制成内标溶液；

（2）标准品溶液的制备：分别称取β-蜕皮甾酮、25R牛膝甾酮、25S牛膝甾酮、牛璜猪去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、甘氨鹅去氧胆酸标准品适量，加内标溶液制成不同浓度的标准品溶液；

（3）供试品溶液的制备：取脑立清制剂加入内标溶液配制成供试品溶液；

（4）线性曲线：将步骤（2）配制的不同浓度的标准品溶液注入液质联用仪，确定6种成分的出峰位置及其定性定量离子对，以标准品和内标浓度比值为横坐标，以标准品和内标定量离子提取离子流峰面积比值为纵坐标绘制出线性曲线；