[发明专利]一种LC-MS/MS测定人血浆中吗替麦考酚酯浓度的检测方法

说明书

本发明属于药物分析技术领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种LC‑MS/MS测定人血浆中吗替麦考酚酯浓度的检测方法。本发明公开了一种LC‑MS/MS测定人血浆中吗替麦考酚酯浓度的检测方法，包括下列步骤：待测血浆样品预处理；液相色谱‑质谱联用检测进行标准曲线制备；液相色谱‑质谱联用检测待测血浆样品中吗替麦考酚酯浓度。本发明方法快速、准确、灵敏度高，预处理方法简单，解决了吗替麦考酚酯在血浆样品的稳定性问题。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种LC-MS/MS测定人血浆中吗替麦考酚酯浓度的检测方法。

背景技术

吗替麦考酚酯（Mycophenolate Mofetil，MMF）是一种免疫抑制药，在体内很快代谢为二-吗啡-丙烯酸（麦考酚酸，MPA），是一种肌苷酸脱氢酶（IMPDH）抑制剂，能特异性地抑制淋巴细胞嘌呤从头合成途径中次黄嘌呤核苷酸脱氢酸的活性，可以选择性抑制 T、B 淋巴细胞增殖，因而具有强大的抑制淋巴细胞增殖的作用。

随着对MMF的研究不断深入，已广泛用于系统性红斑狼疮、免疫性肾病、类风湿性关节炎等非移植性疾病的治疗。MMF 在体内代谢为霉酚酸，MMF 平均口服生物利用度为94%，在健康志愿者体内的血浆清除率为 10L/min，给药 10min后血浆浓度降至 0.4mg/L。MPA 经肝脏代谢为酚化葡糖苷酸（MPAG）失去活性，生物半衰期为 17.9h。 MPAG 约 94％由肾小管排泄，6％从粪便排出，极少量（l％）以原形从尿中排泄。

吗替麦考酚酯在血浆中极其不稳定，且浓度很低，目前尚未关于一个方法可以有效的检测出血浆吗替麦考酚酯浓度的文献报道。因此，急需适用于一种操作简单的测定人血浆中吗替麦考酚酯浓度的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供适用于一种操作简单的测定人血浆中吗替麦考酚酯浓度的检测方法。

本发明公开了一种LC-MS/MS测定人血浆中吗替麦考酚酯浓度的检测方法，包括下列步骤：

（1）待测血浆样品预处理；

（2）液相色谱-质谱联用检测进行标准曲线制备；

（3）液相色谱-质谱联用检测待测血浆样品中吗替麦考酚酯浓度；

所述待测血浆样品预处理步骤为取一定体积的血浆样品，再加入等体积的氘代内标溶液，混合后加入等体积的纯水进行稀释，将样本全部转移至活化后的Cleanert PEP-296Wellplate板中，依次加入H₂O和 50% MeOH进行淋洗；加入100% MeOH进行洗脱，洗脱结束后用固相萃取正压装置压干，收集所有洗脱液，于氮气流下吹干，加入50% ACN复溶，涡旋混合，得到待测样品。

在一优选例中，所述待测血浆样品含0.2-5mg/mL氟化钠。

在一优选例中，所述待测血浆样品含抗凝剂，如EDTA-K2。

在一优选例中，所述液相色谱-质谱联用检测为：

①液相色谱测定，条件为：色谱柱：色谱柱 GL Sciences Inc. InertSustain C183μm, 2.1*50 mm；色谱柱温：40℃；流动相A：0.1%乙酸的水溶液；流动相B：100% ACN溶液；洗液：50%ACN溶液和ACN/MeOH (1:1, v:v)溶液；自动进样器温度为4℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min；

②质谱测定，条件为：离子源为电喷雾离子源，接口温度：300℃，DL温度：250℃，加热气流量：10.00 L/min，加热块温度：400℃，干燥器流量：10.00 L/min；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应为：m/z434.20→m/114.15。