[发明专利]一种从兔的新鲜小肠中快速提取α-葡萄糖苷酶的方法

说明书

本发明公开了一种从兔的新鲜小肠中快速提取α‑葡萄糖苷酶的方法，该方法采用兔的新鲜小肠为原料，收集小肠的肠粘液及肠粘膜，加入弱酸盐缓冲液，高速匀浆后，低温静置，离心收集上清液；在上清液中再加入弱酸盐缓冲液，低温静置，离心分离后取上清液，即得含α‑葡萄糖苷酶的提取液；本发明方法制得的酶提取液比活力为6U/mg，接近商业酶的比活力，且在0℃和‑80℃保存3个月的酶酶活基本保持稳定；与商业酶相比，阿卡波糖对本发明酶提取液具有更高的抑制活性，证明兔小肠源的α‑葡萄糖苷酶提取体系有效；与价格昂贵，货期长的商业酶相比，本发明制得的α‑葡萄糖苷酶安全环保，提取工艺简单且成本低，适于工业化生产和市场推广应用。

技术领域

本发明属于酶制品制备技术领域，具体涉及一种从兔的新鲜小肠中快速提取α-葡萄糖苷酶的方法。

背景技术

葡萄糖苷酶是糖苷水解酶大家族中的一大类酶，主要功能为水解葡萄糖苷键，释放出葡萄糖，是生物体糖代谢途径中不可或缺的一类酶。根据水解糖苷键的类型，可将葡萄糖苷酶分为α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase）和β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase）。α-葡萄糖苷酶主要包括麦芽糖酶、蔗糖酶、异构麦芽糖酶、乳糖酶等酶类，广泛分布在小肠绒毛粘膜细胞刷状缘中，参与机体食物的消化、糖蛋白的生物合成、多糖及糖复合物的合成与分解代谢等多个生物过程；α-葡萄糖苷酶广泛存在于自然界各种生物体内，例如：葡萄、甜玉米、稻谷、果蝇、黑曲霉和酿酒酵母。

目前，常见的提取α-葡萄糖苷酶的方法主要是从小麦或成熟的人克隆结肠腺癌细胞（Caco-2细胞）中提取α-葡萄糖苷酶。此外，还有利用基因工程技术构建表达载体增加α-葡萄糖苷酶基因拷贝数，获得高效表达α-葡萄糖苷酶的重组菌株。目前，国内所需的α-葡萄糖苷酶需依赖进口，市场上的多种 α-葡萄糖苷酶主要来源于微生物的代谢产物，与哺乳动物肠道内的α-葡萄糖苷酶有一定的差异性，且价格昂贵，货期长，造成不便。

大量研究表明动物小肠中具有丰富的α-葡萄糖苷酶，用于提取α-葡萄糖苷酶具有很好的实用前景；从哺乳动物小肠中提取α-葡萄糖苷酶的研究并不多。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种从兔的新鲜小肠中快速提取α-葡萄糖苷酶的方法，采用离心分离技术，达到工艺简单，提取效率高，酶活损失小，对环境无污染的目的。

本发明方法采用兔的新鲜小肠为原料，收集小肠的肠粘液及肠粘膜，加入弱酸盐缓冲液，高速匀浆后，低温静置，离心收集上清液；在上清液中再加入弱酸盐缓冲液，低温静置，离心分离后取上清液，即得含α-葡萄糖苷酶的提取液。

本发明方法的具体操作为：

（1）兔的新鲜小肠预处理：选取兔小肠，用无菌的解剖刀在0 -10℃的低温环境下刮取肠粘膜及肠粘液并收集；

小肠是在兔子处死后0-4 h内获得且0-10℃运输和储存；

（2）往肠粘膜及肠粘液中加入其体积1-10倍的0.1-0.6 mol/L弱酸盐缓冲液，高速匀浆2-30min，0-10℃静置2 -20 h，然后在4℃下4000-10000 g离心5-30 min，收集上清液；

（3）按体积比为1:1-5的比例，将上述上清液与0.1mol/L弱酸盐缓冲液混合，0-10℃静置2-20 h，在4℃下4000-10000g离心5-30min，去沉淀，收集上清液，即得含α-葡萄糖苷酶的提取液；

（4）测定步骤（3）提取液的α-葡萄糖苷酶酶活，以及提取液在不同温度下的稳定性，并检测了阿卡波糖对本发明方法制得的酶提取液的抑制率，实验结果显示本发明方法提取获得的酶液活力与商业酶活力接近，酶活稳定性良好，实验结果也表明本发明方法简单有效。

本发明的优点和技术效果：