[发明专利]一种疏水性环状肽配基纯化人免疫球蛋白G的应用

权利要求书

1.一种疏水性环状肽配基纯化人免疫球蛋白G的应用，其特征在于：所述疏水性环状肽配基的序列为-[HWG-C-AKTE]-、-[YF-C-WRHE]-、-[WV-C-LHHYF]-、-[PYF-C-TIE]-、-[FY-C-DEHL]-；

所述疏水性环状肽配基是通过计算机模拟仿生设计方法得到的，所述仿生设计方法包括如下步骤：

（1）构建模拟体系：选取PBD数据库ID为1FC2的蛋白A（SpA）-人IgG（hIgG）复合物的晶体构象，提取蛋白A与人IgG-Fc片段上的C_H3结合区域，该结合区域的氨基酸序列为Ser383-Asn389（SNGQPEN），选取该结合区域的三维坐标作为模拟体系的坐标信息；

（2）获取仿生多肽库：用NAMD软件计算Ser383-Asn389序列中各残基之间的距离，以Cys为连接残基，在Cys周围插入5至7个氨基酸残基X，组成环状多肽链-[XXX-C-XXXX]-、-[XX-C-XXXX]-、-[XX-C-XXXXX]-、-[XXX-C-XXX]-、-[XX-C-XXX]-，采用AutoDock分子对接程序进行氨基酸定位，筛选确定氨基酸残基X的种类，X代表除Cys以外的19中常见氨基酸残基，调用GROMOS程序获取包含环状6肽、环状7肽和环状8肽序列的仿生多肽库；

（3）多肽库的初筛：利用LeDock分子对接软件将多肽库中的多肽序列与人IgG-Fc片段进行半柔性对接；

（4）多肽库的复筛：利用FlexX软件将步骤（3）初筛得到的多肽序列与Fc片段再次进行半柔性分子对接；

（5）分子动力学模拟筛选：利用Amber软件包对步骤（4）得到的多肽系列进行分子动力学模拟，排除不能与Fc片段稳定结合的多肽序列；

（6）将步骤（5）得到的多肽序列装柱，进行亲和色谱纯化人IgG研究，计算纯化人IgG的纯度和回收率，确定能够与人IgG进行稳定疏水性结合的有效亲和肽配基。

2.根据权利要求1所述的疏水性环状肽配基纯化人免疫球蛋白G的应用，其特征在于，步骤（3）中根据对接打分分数，挑选结合自由能低于-6.0kcal/mol的多肽分子进行下一轮的筛选。

3.根据权利要求1所述的疏水性环状肽配基纯化人免疫球蛋白G的应用，其特征在于，步骤（4）中依据打分分数选取结合自由能低于-7.0kcal/mol的多肽分子进行下一轮的筛选。